Laduviglusib(CHIR-99021)monohydrochloride是一種有效的選擇性GSK-3α/β抑制劑，IC50為10 nM和6.7 nM。Laduviglusib monohydrochloride對GSK-3的選擇性比CDC2，ERK2和其他蛋白激酶高500倍以上。Laduviglusib monohydrochloride還是一種有效的Wnt/β-catenin信號通路激活劑。Laduviglusib monohydrochloride可增強小鼠和人類胚胎干細胞的自我更新。Laduviglusib monohydrochloride能誘導(dǎo)細胞自噬(autophagy)。

MCE的所有產(chǎn)品僅用作科學(xué)研究或藥證申報，我們不為任何個人用途提供產(chǎn)品和服務(wù)

生物活性

體外研究

Laduviglusib monohydrochloride抑制人GSK-3β，Ki值為9.8 nM。Laduviglusib monohydrochloride是一種有機小分子，通過競爭ATP結(jié)合位點來抑制GSK3α和GSK3β。體外激酶測定表明，Laduviglusib monohydrochloride特異性抑制GSK3β(IC50=~5 nM)和GSK3α(IC50=~10 nM)，對其他激酶幾乎沒有影響。在Laduviglusib monohydrochloride存在下，ES-D3細胞的活力在2.5μM時降低24.7%，在5μM時降低56.3%，在7.5μM時降低61.9%，在10μM時降低69.2%，其IC50為4.9μM[

體內(nèi)研究

在ZDF大鼠中，單次口服劑量Laduviglusib monohydrochloride(16 mg/kg或48 mg/kg)單鹽酸鹽可迅速降低血漿葡萄糖，給藥后3-4小時最大降低近150 mg/dl。在照射前4小時給予Laduviglusib monohydrochloride(2 mg/kg)monohydrochloride一次，可顯著提高14.5 Gy腹部照射(ABI)后的存活率。Laduviglusib monohydrochloride monohydrochloride處理顯著阻斷隱窩凋亡和p-H2AX+細胞的積累，并改善隱窩再生和絨毛高度。Laduviglusib monohydrochloride monohydrochloride處理通過阻斷細胞凋亡增加Lgr5+細胞存活率，并早在4小時就有效阻止Olfm4、Lgr5和CD44的減少

實驗參考方法

細胞測定

使用MTT測定法，通過暴露于不同濃度的GSK3抑制劑后的三天來確定小鼠ES細胞的存活率。MTT活性的降低是一種可靠的基于代謝的測試方法，用于量化細胞存活率；這種降低與細胞存活的喪失相關(guān)。在含有LIF的ES細胞培養(yǎng)基中，將2000個細胞過夜播種在明膠涂層的96孔板上。第二天，將培養(yǎng)基更換為無LIF、低血清并添加0.1-1μM BIO或1-10μM SB-216763、CHIR-99021或CHIR-98014的培養(yǎng)基。作為對照組，使用不含GSK3抑制劑或DMSO的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。所有測試條件都以三重復(fù)進行分析。

MCE尚未獨立確認(rèn)這些方法的準(zhǔn)確性。此內(nèi)容僅供參考。

動物給藥

大鼠

從體重<140g的雄性Sprague Dawley大鼠中制備主要肝細胞，在隔離后1-3小時內(nèi)使用。將1×106個細胞的等分放入1mL DMEM/F12培養(yǎng)基中，加入0.2%BSA和CHIR-99021（口服16或48mg/kg）或?qū)φ战M，于低速搖床上37°C的CO2富集大氣中孵育30分鐘，通過離心將其收集，并在緩沖A中加入0.01%NP40后進行裂解；然后再次進行GS測定。

小鼠

使用6-10周齡的小鼠。在C57BL/6背景（F10）上進行PUMA+/+和PUMA-/-的同胞配偶（littermates），以及Lgr5-EGFP(Lgr5-EGFP-IRES-creERT2)小鼠進行全身照射（TBI）或腹部照射（ABI）。小鼠于放射前4小時腹腔注射2mg/kg CHIR99021，或于放射前28小時和4小時腹腔注射1mg/kg SB415286。將小鼠犧牲，收集小腸進行組織學(xué)分析和免疫印跡分析。所有小鼠在犧牲前腹腔注射100mg/kg BrdU。

MCE尚未獨立確認(rèn)這些方法的準(zhǔn)確性。此內(nèi)容僅供參考。