Cycloheximide放線菌酮CHX的作用
Cycloheximide(Naramycin A)是真核生物蛋白質(zhì)合成的抑制劑，抑制體內(nèi)蛋白質(zhì)合成和RNA合成的IC50值分別為532.5 nM和2880 nM。
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Cycloheximide的生物活性
體外研究
Cycloheximide(CHX)是最常用的用于抑制蛋白質(zhì)合成的實驗室試劑。Cycloheximide已顯示可阻斷真核翻譯的延伸階段。Cycloheximide結(jié)合核糖體并抑制eEF2介導(dǎo)的易位。令人驚訝的是，Cycloheximide允許一個完整的易位循環(huán)在停止任何進(jìn)一步的延伸之前繼續(xù)進(jìn)行。Cycloheximide據(jù)推測，Cycloheximide需要E位點結(jié)合的脫酰tRNA才能發(fā)揮活性
體內(nèi)研究
在用200μA電擊訓(xùn)練之前，小鼠接受30、60或120 mg/kg的Cycloheximide注射。Cycloheximide對記憶測試試驗的潛伏期有顯著影響(P<0.001)。在鹽水控制中，這種電擊水平導(dǎo)致測試試驗的延遲明顯高于訓(xùn)練中的延遲。注射最低劑量的Cycloheximide測試，30 mg/kg，導(dǎo)致測試試驗的潛伏期明顯高于鹽水對照組。接受兩種較高劑量Cycloheximide中任一種的小鼠在測試試驗中的潛伏期與鹽水組相當(dāng)，即在這些條件下較高劑量既不增強(qiáng)也不損害記憶，導(dǎo)致倒U型劑量反應(yīng)曲線用于Cycloheximide增強(qiáng)記憶[2]。當(dāng)在HI后0小時或6小時給予環(huán)己酰亞胺時，梗塞體積通過三苯基氯化四唑(TTC)對梗塞區(qū)域的形態(tài)分析測量，分別顯著減少92%和61%，但如果環(huán)己酰亞胺則顯示梗塞減少趨勢不顯著與HI對照組相比，在缺氧缺血(HI)后12小時給藥，延遲至HI后24小時給藥未觀察到保護(hù)作用
cycloheximide的實驗參考方法
細(xì)胞分析
為了測試細(xì)胞增殖，將每孔3000-5000個細(xì)胞（HeLa，HTB1和HEK 293T細(xì)胞;Jurkat，BT 474，HCC 1395，HCC 1937，HCC 2218和MDA MB231細(xì)胞;MCF 10A）接種在96孔板中并且允許堅持過夜。然后加入以指定濃度（0.1nM-1000μM）溶解在DMSO中的環(huán)己酰亞胺，將細(xì)胞再溫育24小時。以每孔1μCi加入[3H]-胸苷，并繼續(xù)孵育另外7小時。用PBS洗滌細(xì)胞兩次，然后用胰蛋白酶消化，然后用Tomtec收集器收集細(xì)胞并結(jié)合GF/C過濾墊。然后通過閃爍計數(shù)測量胸苷攝取。
MCE尚未獨立確認(rèn)這些方法的準(zhǔn)確性。它們僅供參考。
cycloheximide的Animal Administration
小鼠
在該實驗中使用雄性ICR小鼠（約2個月大）。環(huán)己酰亞胺Cycloheximide放線菌酮以0（鹽水對照），30,60或120mg/kg的濃度IP施用。在訓(xùn)練前30分鐘施用環(huán)己酰亞胺注射。120mg/kg劑量通常用于研究小鼠的健忘癥。注意，在大鼠（1-3mg/kg）中遺忘的環(huán)己酰亞胺劑量比在小鼠中低得多，這與大鼠和小鼠的LD50s的類似差異一致。注射后30-60分鐘測量的環(huán)己酰亞胺劑量為120-150mg/kg導(dǎo)致腦蛋白質(zhì)合成的約95％抑制;30mg/kg的劑量產(chǎn)生約80％的腦蛋白質(zhì)合成抑制。
大鼠
在甲氧氟烷麻醉下，在7日齡Sprague Dawley大鼠幼仔中進(jìn)行單側(cè)頸動脈結(jié)扎。頸部在中線切開，右頸總動脈用4-0絲永久結(jié)扎。每只動物的手術(shù)總時間從未超過5分鐘。手術(shù)后，將大鼠返回母親進(jìn)行恢復(fù)并喂食2小時。然后將幼崽置于100分鐘的缺氧期（8％O2,92％N2）中，將它們置于部分浸沒在溫控水浴中的氣密室中，以使室內(nèi)的環(huán)境溫度保持恒定36°。C。在HI與環(huán)己酰亞胺治療組中，大鼠幼仔在恢復(fù)0,6,12或24小時時以0.6mg/kg的劑量腹膜內(nèi)注射環(huán)己酰亞胺，并向HI對照給予等體積的生理鹽水。組。然后，將大鼠幼崽送回大壩直至犧牲;在HI后48和72小時分別在深度戊巴比妥麻醉（60mg/kg，腹膜內(nèi)）下進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)和氯化三苯基四氮唑（TTC）獲得全腦組織。
MCE尚未獨立確認(rèn)這些方法的準(zhǔn)確性。它們僅供參考。
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