存在的問(wèn)題：

完整膜蛋白結(jié)晶最佳條件的發(fā)現(xiàn)對(duì)于研究者而言非常耗時(shí)。晶體可能需要兩周或更長(zhǎng)時(shí)間才能形成，這使得優(yōu)化結(jié)晶生長(zhǎng)條件的過(guò)程極其漫長(zhǎng)。

光漂白后的熒光恢復(fù) (FRAP)

預(yù)篩選結(jié)晶條件以消除那些不利于結(jié)晶的條件。用戶(hù)可以在短短 30 分鐘內(nèi)將這些條件縮小范圍至一小部分利于結(jié)晶的條件。

如果蛋白質(zhì)不能在脂質(zhì)立方相中擴(kuò)散，

那么它們就不可能形成晶體。

FRAP 系統(tǒng)可以檢查蛋白質(zhì)制劑，節(jié)省用戶(hù)時(shí)間

為獲得完整的膜蛋白，F(xiàn)RAP 在廣泛不同的鹽晶條件下對(duì) 96 孔板進(jìn)行檢測(cè)。在大多數(shù)條件下良好的光漂白熒光恢復(fù)意味值得用該樣品進(jìn)行 LCP 結(jié)晶。

FRAP 可以用來(lái)確定哪種蛋白質(zhì)制劑最好

我們使用兩種不同的去污劑對(duì)一個(gè)完整的膜蛋白進(jìn)行純化，因此在廣泛的結(jié)晶條件下 FRAP 熒光恢復(fù)存在顯著差異。這里 LDAO 被證明是一種更適合純化的去污劑，應(yīng)該用于結(jié)晶試驗(yàn)。如果在 SDS 中純化的蛋白質(zhì)幾乎沒(méi)有遷移率，那么它就不會(huì)結(jié)晶。

在 30 分鐘內(nèi)篩選 96 種結(jié)晶條件

FRAP 能夠自動(dòng)分析 96 孔 LCP 板以確定每個(gè)液滴的遷移率。每個(gè)孔都通過(guò)聚焦的激光點(diǎn)進(jìn)行光漂白，并測(cè)量固定時(shí)間點(diǎn)后的熒光恢復(fù)。而在液滴中可遷移的蛋白質(zhì)百分比表明是否可能發(fā)生結(jié)晶。

1. FRAP 成像儀發(fā)射光漂白激光脈沖，該脈沖從二向色鏡反射，通過(guò)激發(fā)濾光片，再被第二個(gè)二向色鏡反射，從而漂白樣品。

2. LED 通過(guò)聚光鏡照射光線(xiàn)，光線(xiàn)沿著與激光相同的路徑，照亮樣品。

3. 接著處理熒光圖像以確定表明蛋白質(zhì)遷移率的光漂白點(diǎn)的恢復(fù)時(shí)間。

數(shù)據(jù)分析容易

系統(tǒng)提供的軟件組用于跟蹤和分析每個(gè)實(shí)驗(yàn)的得分。得分以顏色編碼的概覽顯示，讓用戶(hù)一眼就能識(shí)別出結(jié)晶孔。用戶(hù)可以在軟件中對(duì)結(jié)晶孔進(jìn)行標(biāo)記，以備日后參考。在上面的例子中，H8 孔蛋白遷移率最高，最有可能生長(zhǎng)晶體。D12 孔遷移率為零，最不可能生長(zhǎng)晶體。