Zelavespib hydrochloride抑制劑
Zelavespib(PU-H71)hydrochloride是一種有效的Hsp90抑制劑，在MDA-MB-468細胞中，對Hsp90的IC50值為51 nM。
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體外研究
Zelavespib hydrochloride是一種有效的Hsp90抑制劑，在MDA-MB-468細胞中的IC50為51 nM。Zelavespib抑制多種腫瘤細胞的生長，例如MDA-MB-468、MDA-MB-231和HCC-1806細胞，IC50s為65±8 nM、140±5 nM和分別為87±3 nM，這種抑制與G2-M阻滯相關(guān)。Zelavespib(10-1000 nM)可誘導三陰性乳腺癌(TNBC)顯著凋亡。Zelavespib(0.5,1μM)還會下調(diào)參與TNBC侵襲潛力的癌蛋白。
Zelavespib(0.5μM)可減少并耗盡BCR信號激酶。Zelavespib(0.25-10μM)對CLL細胞具有細胞毒性，但對PBMC或靜息B細胞影響極小。此外，Zelavespib(0-1μM)通過誘導線粒體凋亡來降低CLL活力，并在0.5μM時拮抗來自CLL微環(huán)境的生存信號。
Zelavespib(0.05μM)誘導MDA-MB-231、BT-474和MCF7細胞凋亡，并且TNF-α可以增強這種誘導作用。Zelavespib(0.05μM)可降解IKKβ，并下調(diào)TNF-α處理誘導的NF-κB轉(zhuǎn)錄活性。
體內(nèi)研究
Zelavespib(75 mg/kg，腹膜內(nèi)注射)引起腫瘤內(nèi)積聚，延長抗腫瘤驅(qū)動分子的下調(diào)，在MDA-MB-468荷瘤小鼠中以無毒劑量完成并保留反應。
Zelavespib（75 mg/kg，3×周，腹膜內(nèi)注射）可抑制腫瘤的生長，這種作用與多種Hsp90調(diào)節(jié)的惡性驅(qū)動蛋白的下調(diào)有關(guān)。推薦閱讀：DPPG sodium
實驗參考方法
激酶測定
測量在黑色的96孔微滴定板上進行。簡單來說，細胞裂解液是通過在-70°C凍結(jié)破裂細胞膜，并將細胞提取物溶解在含有蛋白酶和磷酸酶抑制劑（Zelavespib等）的HFB[20 mM Hepes(K)，pH 7.3，50 mM KCl，5 mM MgCl2，20 mM Na2MoO4，0.01%Nonidet P-40]中。記錄飽和曲線，在其中熒光標記的geldanamycin(Cy3B-GM)(3 nM)與逐漸增加的細胞裂解液進行處理。選擇在偏振度（mP）讀數(shù)對應于90%-99%結(jié)合配體的裂解液量進行競爭性研究。這里，每個96孔板包含3 nM Cy3B-GM，細胞裂解液和被測試的Hsp90抑制劑，總體積為100μL。將板在4°C的搖床上放置24小時，并記錄以mP為單位的熒光偏振（FP）值。EC50值被確定為使Cy3B-GM排位50%的競爭物濃度。在Analyst GT微板讀取器上進行FP測量。
細胞測定
使用CellTiter-Glo熒光活細胞檢測試劑盒評估選定的Hsp90抑制劑的抗增殖效果。簡單來說，指數(shù)增長的MDA-MB-468、MDA-MB-231和HCC-1806細胞接種到黑色96孔微滴定板中，并在包含載體對照（DMSO）或Zelavespib的培養(yǎng)基中孵育指定時間，在37°C下進行。每個實驗條件有3個重復小孔的板子，每種細胞線以8×103細胞的密度在100μL培養(yǎng)基中接種。暴露細胞于Hsp90抑制劑后，將板子平衡至室溫（20-25℃）約30分鐘，然后向每個孔添加100μL CellTiter-Glo試劑。在軌道振蕩器上混合板子2分鐘，然后在室溫下孵育15分鐘至2小時。在Analyst GT微板讀取器中測量每個井中的發(fā)光信號。通過比較處理過的與對照細胞得到的發(fā)光讀數(shù)，計算出細胞生長抑制的百分比，考慮初始細胞數(shù)量（時間0）。IC50被計算為抑制細胞增長50%的藥物濃度。
MCE尚未獨立確認這些方法的準確性。僅供參考。
動物給藥
小鼠
攜帶MDA-MB-468腫瘤的小鼠，當腫瘤體積達到100-150 mm3時，使用不同的劑量和計劃進行腹腔內(nèi)治療：第01組（n=8）PBS；第02組（n=8）隔天用Zelavespib 50 mg/kg；第03組（n=8）每日5次用Zelavespib 50 mg/kg；第04組（n=8）每周3次用Zelavespib 75 mg/kg；第05組（n=8）隔天用Zelavespib 75 mg/kg。攜帶HCC-1806或MDA-MB-231異種移植腫瘤的小鼠隔日接受Zelavespib 75 mg/kg治療。使用游標卡尺測定腫瘤體積，并計算其長度×寬度2×0.4的乘積作為腫瘤體積。在指定的日期上，以每組小鼠的中位數(shù)腫瘤體積±SD表示腫瘤體積。
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