AF488 NHS ester是一種胺特異性熒光探針(Em=525 nm)。AF488 NHS ester在水和生物樣品中，與巰基和胺反應(yīng)，并在衍生化后改變它們的化學(xué)結(jié)構(gòu)和熒光性質(zhì)。

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AF488 NHS ester的生物活性

體外研究

AF488 NHS ester的IgG熒光標(biāo)記與抗IgG固相肽庫篩選

(1)將凍干的IgG以5 g/L的濃度溶解在50 mM磷酸鈉、20 mM氯化鈉、PH 8.3的溶液中。

(2)1 mg AF488 NHS ester溶于100?L extra dry DMF中，加入1 mL(1)中溶液，室溫旋轉(zhuǎn)孵育1 h。

(3)用Amicon Ultra 0.5-mL離心式過濾裝置，配有3-kDa MWCO過濾器收集樣品。

(4)六聚體或四聚體去保護(hù)文庫在50 mM磷酸鈉、150 mM氯化鈉、PH 7.4(PBS)溶液中以5×沉淀樹脂體積洗滌三次以平衡。

(5)用50 mM磷酸鈉、150 mM氯化鈉、0.2%吐溫(PH 7.4)溶液稀釋IgG-AF488至終濃度為1.3 mg/mL。

(6)將(4)和(5)在2-8°C下孵育過夜。

(7)用50 mM磷酸鈉、150 mM氯化鈉、0.1%吐溫20、PH 7.4(PBS-T)洗滌樹脂珠。

(8)將樹脂在40?L PBS-T的96孔板中每孔沉積1個(gè)珠，然后使用熒光顯微鏡以10倍放大率成像。在480 nm激發(fā)下，以510 nm發(fā)射強(qiáng)度為閾值進(jìn)行Alexa Fluor 488熒光測(cè)量和熒光篩選。

AF488 NHS ester儲(chǔ)存液

用DMF配制20 mM的AF488 NHS ester。

注：AF488 NHS ester儲(chǔ)存液建議分裝后于-20°C避光保存。

MCE尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性。僅供參考。