BioPhase® 8800系統(tǒng)對不同長度環(huán)狀RNA疫苗的高通量純度分析
環(huán)狀RNA（CircRNA）以穩(wěn)定性、免疫原性低，半衰期長、無需加帽和加尾等優(yōu)勢吸引多家疫苗企業(yè)紛紛布局。毛細(xì)管電泳技術(shù)可有效分離CircRNA疫苗產(chǎn)品中CircRNA、前體線性RNA（Precursor RNA）、未成環(huán)RNA（Nicked RNA），是CircRNA疫苗質(zhì)量控制的有力分析工具[1]。作為高通量的毛細(xì)管電泳分析系統(tǒng)，BioPhase® 8800 系統(tǒng)可在一個(gè)系統(tǒng)中通過8根平行的毛細(xì)管同時(shí)進(jìn)行檢測分析，以8倍的通量獲得與PA 800 Plus同質(zhì)量的數(shù)據(jù)，為生物工藝、分析開發(fā)和QA/QC提供高通量分析。
結(jié)果
使用同一長度（1765 nt）、不同純化階段的樣品考察CircRNA與其他雜質(zhì)的分離，根據(jù)對照品遷移時(shí)間對樣品中Nicked RNA、Precursor RNA進(jìn)行定性，CircRNA出峰最晚[1]，結(jié)果見圖1，CircRNA與Precursor RNA等雜質(zhì)可實(shí)現(xiàn)良好的分離。通過BioPhase軟件對樣品中各峰進(jìn)行積分，并以CircRNA校正峰面積占總峰面積的百分比表示純度，未純化和純化后的CircRNA樣品的純度分別為71.45%，92.44%。
利用CGE-LIF方法考察了三個(gè)不同長度（744 nt，1765 nt，3589 nt）的樣品中，CircRNA與其他雜質(zhì)的分離情況，見圖2，峰1、3、5分別為744 nt，1765 nt，3589 nt的precursor RNA峰，峰2、4、6分別為744 nt，1765 nt，3589 nt的CircRNA峰（鑒定數(shù)據(jù)未展示）。對于Precursor RNA與CircRNA 的分離， CircRNA環(huán)狀構(gòu)象體積起到主要的分離作用，由于長度越長，環(huán)狀構(gòu)象體積越大，因此其與線性RNA的分離度也越大；對于Precursor RNA與Nicked RNA 的分離，由于兩者都是線性的結(jié)構(gòu)，其分離度規(guī)律為長度越長，分離度越小。各峰的分離度統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表1。
圖2. BioPhase® 8800 系統(tǒng)分離分析不同長度的CircRNA樣品。樣品A：744 nt；樣品B：1765 nt；樣品C：3589 nt；1、4、7號(hào)峰：Nicked RNA；2、5、8號(hào)峰：Precursor RNA；3、6、9號(hào)峰：CircRNA
注：MT：遷移時(shí)間；CAP%：校正峰面積百分比，即純度；R：分離度
結(jié)論
本文介紹了利用BioPhase® 8800 系統(tǒng)對CircRNA疫苗及產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)進(jìn)行了高通量的分離分析
1
方法對不同長度的CircRNA樣品（700 nt-3600 nt）均可實(shí)現(xiàn)分離分析，且CircRNA長度越長，相應(yīng)的Precursor RNA 與CircRNA分離度越大，Precursor RNA與Nicked RNA分離度越��；
2
方法可同時(shí)進(jìn)行8個(gè)樣品的檢測分析，6小時(shí)可完成96個(gè)樣品的檢測，平均每個(gè)樣品用時(shí)為3.9 min，顯著提高了大量樣本的分析檢測效率；
3
方法可準(zhǔn)確反映不同純化程度樣品中CircRNA的純度變化，以高效評價(jià)CircRNA疫苗的環(huán)化效率、純化工藝、產(chǎn)品質(zhì)量等。該方案可更快速地評估樣品性質(zhì)，加快產(chǎn)品從研發(fā)到上市的時(shí)間。
參考文獻(xiàn)
[1] SCIEX Tech Note：CGE-LIF方法對環(huán)狀RNA疫苗的純度分析（RUO-MKT-02-15386-ZH-B）
結(jié)果
使用同一長度（1765 nt）、不同純化階段的樣品考察CircRNA與其他雜質(zhì)的分離，根據(jù)對照品遷移時(shí)間對樣品中Nicked RNA、Precursor RNA進(jìn)行定性，CircRNA出峰最晚[1]，結(jié)果見圖1，CircRNA與Precursor RNA等雜質(zhì)可實(shí)現(xiàn)良好的分離。通過BioPhase軟件對樣品中各峰進(jìn)行積分，并以CircRNA校正峰面積占總峰面積的百分比表示純度，未純化和純化后的CircRNA樣品的純度分別為71.45%，92.44%。
圖1. BioPhase® 8800 系統(tǒng)分離分析不同純化階段的CircRNA樣品
利用CGE-LIF方法考察了三個(gè)不同長度（744 nt，1765 nt，3589 nt）的樣品中，CircRNA與其他雜質(zhì)的分離情況，見圖2，峰1、3、5分別為744 nt，1765 nt，3589 nt的precursor RNA峰，峰2、4、6分別為744 nt，1765 nt，3589 nt的CircRNA峰（鑒定數(shù)據(jù)未展示）。對于Precursor RNA與CircRNA 的分離， CircRNA環(huán)狀構(gòu)象體積起到主要的分離作用，由于長度越長，環(huán)狀構(gòu)象體積越大，因此其與線性RNA的分離度也越大；對于Precursor RNA與Nicked RNA 的分離，由于兩者都是線性的結(jié)構(gòu)，其分離度規(guī)律為長度越長，分離度越小。各峰的分離度統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表1。
表1. 不同純化階段、不同長度的CircRNA樣品分析結(jié)果
結(jié)論
本文介紹了利用BioPhase® 8800 系統(tǒng)對CircRNA疫苗及產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)進(jìn)行了高通量的分離分析
1
方法對不同長度的CircRNA樣品（700 nt-3600 nt）均可實(shí)現(xiàn)分離分析，且CircRNA長度越長，相應(yīng)的Precursor RNA 與CircRNA分離度越大，Precursor RNA與Nicked RNA分離度越��；
2
方法可同時(shí)進(jìn)行8個(gè)樣品的檢測分析，6小時(shí)可完成96個(gè)樣品的檢測，平均每個(gè)樣品用時(shí)為3.9 min，顯著提高了大量樣本的分析檢測效率；
3
方法可準(zhǔn)確反映不同純化程度樣品中CircRNA的純度變化，以高效評價(jià)CircRNA疫苗的環(huán)化效率、純化工藝、產(chǎn)品質(zhì)量等。該方案可更快速地評估樣品性質(zhì)，加快產(chǎn)品從研發(fā)到上市的時(shí)間。
參考文獻(xiàn)
[1] SCIEX Tech Note：CGE-LIF方法對環(huán)狀RNA疫苗的純度分析（RUO-MKT-02-15386-ZH-B）
來源：SCIEX
聯(lián)系電話：產(chǎn)品咨詢：400-821-3897（手機(jī)撥入）/售后咨詢：800-820-3488 （座機(jī)撥入）
E-mail：bing.xiao@sciex.com
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