LRRK2-IN-1 是一種有效的，選擇性的 LRRK2 抑制劑，作用于 LRRK2 （G2019S） 和 LRRK2 （WT），IC50 值分別為 6 nM 和 13 nM。

 

 

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　　野生型和G2019S的轉導導致TR-FRET信號高2.5倍，LRRK2-IN-1可以以劑量依賴的方式抑制TR-FRET信號，IC50值分別為0.08?M和0.03?M。LRRK2-IN-1抑制DCLK2的IC50值為45 nM，在AURKB、CHEK2、MKNK2、MYLK、NUAK1和PLK1的生化檢測中，IC50值大于1?M。LRRK2-IN-1抑制MAPK7, EC50為160 nM。LRRK2- in -1誘導Ser910和Ser935磷酸化的劑量依賴性抑制，同時失去與野生型LRRK2和LRRK2[G2019S]穩(wěn)定轉染到HEK293細胞中的14-3-3結合。LRRK2-IN-1對HepG2細胞具有中等細胞毒性，IC50為49.3?M。LRRK2-IN-1分別在15.6?M和3.9?M的S9存在和不存在時表現(xiàn)出遺傳毒性。LRRK2-IN-1抑制HCT116和AsPC-1細胞的增殖、遷移，并以凋亡為標志誘導細胞死亡。

 

 

 

　　LRRK2- in -1 （100mg /kg, i.p）誘導小鼠腎臟中LRRK2的去磷酸化。瘤周注射LRRK2-IN-1 （100 mg/kg）可顯著降低異種移植AsPC-1腫瘤的體積和重量。

 

　　MCE尚未獨立證實這些方法的準確性。僅供參考。同靶點產品：Bafetinib是Bcr-Abl抑制劑

 

 

 

　　瞬時轉染相應cDNA構建物36 h后，用谷胱甘肽sepharose從HEK293細胞裂解液中純化活性GST-LRRK2（1326-2527）、GST-LRRK2 [G2019S]（1326-2527）、GST-LRRK2 [A2016T+G2019S]（1326-2527）酶。肽激酶試驗一式兩份，在40?L的總體積中，含有0.5?g LRRK2激酶（純度約為10%，最終濃度為8 nM），50 mM Tris/HCl, pH 7.5, 0.1 mM EGTA, 10 mM MgCl2, 20?M Nictide, 0.1?M [γ-32P]ATP （500 cpm/pmol）和指示濃度的抑制劑溶解在DMSO中。在30℃下孵育15分鐘后，將35?L的反應混合物滴在P81磷酸纖維素紙上，浸泡在50 mM磷酸中，終止反應。樣品廣泛洗滌，[γ-32P]ATP摻入Nictide通過切倫科夫計數(shù)定量。GraphPad Prism采用非線性回歸分析計算IC50值。

 

　　MCE尚未獨立證實這些方法的準確性。僅供參考。

 

 

　　將細胞（每孔104個細胞）接種到96孔組織培養(yǎng)板中，一式三份。LRRK2-IN-1在0、0.31、0.63、1、2、5、10和20 μM的濃度下以DMSO為載體進行培養(yǎng)。處理48h后，每孔加入10 μL TACS MTT試劑，37℃孵育至細胞內可見深色結晶沉淀。在DMSO中加入266 mM NH4OH 100 μL，低速搖板1分鐘。搖勻后，避光孵育10分鐘，使用微孔板讀卡器讀取每孔的OD550。將結果取平均值并計算為DMSO（車輛）控制的百分比+/-平均值的標準誤差。

 

　　MCE尚未獨立證實這些方法的準確性。僅供參考。