■ CCK-8 比色檢測試劑盒 

Cell Counting Kit-8，是一種基于 WST-8 而廣泛應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度、無放射性的比色檢測試劑盒。

CCK-8 溶液可以直接加入到細胞樣品中，不需要預(yù)配各種成分。WST-8 在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶的電子傳遞還原生成橙黃色的甲瓚 (Formazan)。而線粒體脫氫酶只在活細胞中存在，因此細胞增殖越多越快，則顏色越深；化合物的細胞毒性越大，細胞死亡量越多，則顏色越淺。對于同樣的細胞，顏色的深淺 (生成的甲瓚量) 和細胞數(shù)目呈線性關(guān)系�？赏ㄟ^酶標儀檢測 430-490 nm 處的吸光度 (OD 值)，OD 值與細胞活力成正比，從而進行定量分析。

 

 

 
MCE CCK-8 產(chǎn)品一經(jīng)推出，就受到了大家的信賴和一致好評，其助力發(fā)表的文章數(shù)量也在逐年增加。小 M 對發(fā)表文章的影響因子進行分析發(fā)現(xiàn)，CCK-8 助力發(fā)文期刊的影響因子分布較廣，IF≥10 的共有 170+ 篇，5≤IF≤10 的共有 560+ 篇。

 

 
■ 高分文獻驗證

其中最高分文章為中國科學(xué)院上海營養(yǎng)與健康研究所肖意傳教授團隊的 Cytoplasmic DNA sensing by KU complex in aged CD4+ T cell potentiates T cell activation and aging-related autoimmune inflammation，發(fā)表在 Immunity (IF 43.474)。

 

其他高分期刊還包括

Mol Cancer (IF 41.444)；
Signal Transduct Target Ther (IF 38.104) ;
Adv Mater (IF 32.086) 等。
 

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更多文章可下滑點擊

Cell Mol Immunol. 2022 Sep;19(9):1030-1041.  

J Med Virol. 2022 Aug;94(8):3847-3856.    

ACS Nano. 2022 Aug 3. 10.1021/acsnano.2c06300.   
Nat Commun. 2022 May 10;13(1):2563.

Immunity. 2021 Apr 13;54(4):632-647.e9.   
Adv Mater. 2021 Nov;33(45):e2104594. 
Nat Cell Biol. 2020 Dec;22(12):1447-1459.  
Signal Transduct Target Ther. 2020 Nov 6;5(1):216.  
Mol Cancer. 2019 Nov 14;18(1):161.

Cell Discov. 2019 Aug 6;5:39.

 

 
■ 客戶驗證 1---細胞毒性實驗
為了驗證篩選的 iZAK2 對衰老相關(guān)自身免疫的治療作用，在小鼠原代 CD4⁺ T 細胞中檢測了 iZAK2 的生物學(xué)功能，結(jié)果發(fā)現(xiàn) iZAK2 處理不影響細胞活力或細胞質(zhì) DNA 積累。此外，iZAK2 可減輕老齡小鼠實驗性自身免疫性腦脊髓炎 (EAE) 相關(guān)自身免疫癥狀，以上結(jié)果都表明 iZAK2 是一種潛在的治療衰老相關(guān)自身免疫性疾病的化合物。

  圖 4. iZAK2 對小鼠原代 CD4⁺ T 細胞活力的影響^[1]

 

■ 客戶驗證 2---細胞活力檢測

為了驗證 poly (I:C) 預(yù)處理在體外抑制炎癥反應(yīng)和凋亡細胞死亡，用 CCK-8 法檢測 H9C2 細胞中不同復(fù)氧時間和不同 poly (I:C) 濃度下的細胞活力，結(jié)果表明 poly (I:C) 預(yù)處理顯著抑制了糖氧剝奪 (OGD) 誘導(dǎo)的炎癥和凋亡反應(yīng)來限制細胞死亡。
 

圖 5. CCK-8 法測定不同復(fù)氧時間和

不同 poly (I:C) 濃度下的細胞活力^[2]

 

 

■ 客戶驗證 3---細胞增殖測定

吞噬死亡細胞對于維持組織內(nèi)穩(wěn)態(tài)和預(yù)防炎癥是必不可少的，經(jīng)典理論認為這一過程主要是由巨噬細胞和樹突狀細胞等專職性吞噬細胞完成的。然而，越來越多的數(shù)據(jù)表明鄰近的非專職性細胞在這一過程中也發(fā)揮了作用。雖然吞噬的死細胞可以為活細胞提供營養(yǎng)，但實驗結(jié)果表明吞噬和沒有吞噬死細胞的細胞在增殖方面并沒有很顯著的差異。

圖 6. CCK-8 法測定 NIH 3T3 細胞

吞噬死細胞前后的細胞活力^[3]

 

 小白: CCK-8 與細胞孵育后一般多久可以檢測呢？

 小M: CCK-8 的培養(yǎng)時間一般為 1-4 h，但在培養(yǎng) 30 min 左右即可肉眼觀察顯色程度，最佳反應(yīng)時間以具體顯色的最佳時間為準。

 小白: CCK-8 檢測依賴于脫氫酶催化的反應(yīng)，所以還原劑會干擾檢測，那我該如何確定我的待測溶液是否有還原性呢？

 小M: 將不含細胞的待測溶液孔中加入 10 μL CCK-8 溶液，孵育 1-4 h 后，測定在 450 nm 處的空白吸光度。若測得的吸光度很小，則說明含有較少的還原劑，正式實驗可以直接加入 CCK-8 進行檢測；若測得的吸光度相對較大，則說明存在較多還原劑，正式實驗時需去除培養(yǎng)基，將細胞洗滌兩次后，再加入新的培養(yǎng)基和 10 μL CCK-8 溶液。
 小白: 那培養(yǎng)基中含有酚紅會對最終的實驗結(jié)果有影響嗎？
 小M: 培養(yǎng)基中的酚紅不會影響實驗結(jié)果，酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去。
 小白: CCK-8 和活細胞內(nèi)的脫氫酶持續(xù)反應(yīng)使溶液顏色不斷加深，我該如何終止 CCK-8 反應(yīng)呢？

 小M: 以下方法任選其一均可終止 CCK-8 反應(yīng)：a). 在顯色反應(yīng)后，將培養(yǎng)板放置 4℃ 冰箱內(nèi)；b). 每孔加 10 μL 0.1 M HCl 溶液；c). 每孔加 10 μL 1% (w) 的 SDS 溶液。

 小M: 此外，需要注意！若培養(yǎng)時間較長，一定要注意蒸發(fā)問題�？梢栽� 96 孔板的四周每孔中加入培養(yǎng)基或無菌 PBS，同時將培養(yǎng)板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方，緩減蒸發(fā)。

 小白：Get Get 新技能GET
 

 

參考文獻

1. Wang Y, et al. Cytoplasmic DNA sensing by KU complex in aged CD4+ T cell potentiates T cell activation and aging-related autoimmune inflammation. Immunity. 2021 Apr 13;54(4):632-647.e9.

2. Chen E, et al. Poly(I:C) preconditioning protects the heart against myocardial ischemia/reperfusion injury through TLR3/PI3K/Akt-dependent pathway. Signal Transduct Target Ther. 2020 Nov 6;5(1):216.

3. Lu J, et al. Efficient engulfment of necroptotic and pyroptotic cells by nonprofessional and professional phagocytes. Cell Discov. 2019 Aug 6;5:39.