離子交換層析色譜法的原理、步驟及應(yīng)用
瀏覽次數(shù):5115 發(fā)布日期:2022-9-15
來源:蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司
離子交換層析也稱為離子交換色譜,它是利用樣品中帶電分子與色譜基質(zhì)固定相中帶相反電荷的部分之間的相互作用。這種類型的分離很難使用其他技術(shù),因為電荷很容易被所用緩沖液的 pH 值控制。兩種類型的離子交換分離總體來說是陽離子交換和陰離子交換。在交換過程中若是陰離子互換為固定相帶+電荷,相反在陽離子互換過程中,固定相帶負電荷。
離子交換層析色譜的原理
離子交換層析IEC 色譜法用于帶電生物分子的分離。含有帶電分子的粗樣品用作液相。當它通過色譜柱時,分子與固定相中帶相反電荷的位點結(jié)合。使用不同離子強度的溶液洗脫基于其電荷分離的分子。通過使這種溶液通過柱子,可根據(jù)分子的不同電荷進行高度選擇性的分離。
離子交換色譜程序的關(guān)鍵步驟:
1.將不純的蛋白質(zhì)樣品以特定的 pH 值加載到離子交換色譜柱中。
2.帶電荷的蛋白質(zhì)將與樹脂中帶相反電荷的官能團結(jié)合
3.鹽梯度用于洗脫分離的蛋白質(zhì)。在低鹽濃度下,具有少量帶電基團的蛋白質(zhì)被洗脫,而在較高鹽濃度下,具有多個帶電基團的蛋白質(zhì)被洗脫。
4.通過洗滌柱子去除不需要的蛋白質(zhì)和雜質(zhì)。
還可以根據(jù)等電點 (pI) 應(yīng)用 pH 梯度來洗脫單個蛋白質(zhì),即蛋白質(zhì)中的氨基酸帶有中性電荷并因此不會在電場中遷移的點。由于氨基酸是兩性離子化合物,它們包含具有正電荷和負電荷的基團。根據(jù)環(huán)境的 pH 值,蛋白質(zhì)帶有正電荷、負電荷或零電荷。在它們的等電點,它們不會與柱樹脂中的帶電部分相互作用,因此會被洗脫。
使用陰離子交換樹脂可以使用降低的 pH 梯度來洗脫蛋白質(zhì),并且可以使用增加的 pH 梯度從陽離子交換樹脂中洗脫蛋白質(zhì)。這是因為增加流動相的緩沖液 pH 值會導致蛋白質(zhì)的質(zhì)子化程度降低(帶正電荷的程度降低),因此它不能與帶負電荷的樹脂形成離子相互作用,從而導致被洗脫。相反,降低流動相的 pH 值會導致分子質(zhì)子化程度更高(帶負電荷更少),從而使其洗脫。
離子交換層析中的離子交換樹脂選擇
離子交換層析中的離子交換樹脂具有與固體基質(zhì)共價連接的帶正電或帶負電的官能團;|(zhì)通常由纖維素、聚苯乙烯、瓊脂糖和聚丙烯酰胺制成。影響樹脂選擇的一些因素是陰離子或陽離子交換劑、流速、弱或強離子交換劑、樹脂的粒徑和結(jié)合能力。 天地人和的離子交換層析介質(zhì)是以瓊脂糖凝膠為基質(zhì)的,所以保留了較多天然多糖等成分具有較好的親水性以及孔等結(jié)構(gòu),與生物活性大分子的相容性良好,比較適用于蛋白、酶、多糖、核酸、質(zhì)粒等的分離和純化。比如: Q Beads 6FF、IexCap Q 6FF、SP Beads 6FF、 IexCap SP 6FF、DEAE Beads 6FF、IexCap DEAE 6FF、 CM Beads 6FF、IexCap CM 6FF、Smac Q、 IexCap Smac Q、Smac Q 40、IexCap Smac Q 40、 Smac SPIexCap、Smac SP、Smac SP 40、 IexCap Smac SP 40等均屬于此類介質(zhì)。
離子交換色譜的應(yīng)用
離子交換層析法具有廣泛的適用性、高容量和簡單性以及高分辨率是其成為普遍使用的分離方法該技術(shù)主要用于分離和純化帶電生物分子如多肽、蛋白質(zhì)、多核苷酸和核酸。
其離子交換色譜法主要用于:
- 生命科學、基因組學、蛋白質(zhì)學的應(yīng)用,比如:白蛋白、重組生長因子、酶等血液成分的分離純化。
- 生物技術(shù)分析應(yīng)用,例如:質(zhì)量控制和過程監(jiān)控
- 食品與臨床研究:研究小麥品種及蛋白尿與不同腎臟疾病的相關(guān)性。
- 發(fā)酵:陽離子交換樹脂用于監(jiān)測 ß-半乳糖苷酶生產(chǎn)過程中的發(fā)酵過程。
蘇州阿爾法生物提供的瓊脂糖凝膠介質(zhì)、葡聚糖凝膠介質(zhì)等蛋白純化和分離填料以及相關(guān)生物試劑。另外還提供、組氨酸標簽蛋白親和純化介質(zhì)、GST-tag蛋白親和純化介質(zhì)、 MBP-tag蛋白親和純化介質(zhì)、生物素Biotin-tag蛋白親和純化介質(zhì)、Strep-tagll標簽親和純化介質(zhì)、 標簽抗體親和純化介質(zhì)等標簽蛋白親和層析介質(zhì);
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