人體不能合成維生素B₁₂，主要依靠動物性食品提供，含量豐富者有肝腎組織、肉類、蛋類和乳類制品等。此外特殊保健食品、功能性飲料等食品中也會含有相對較多的維生素B₁₂。維生素B₁₂在人體代謝當(dāng)中起到非常重要的作用，缺乏維生素B₁₂不僅會導(dǎo)致貧血，還會引起心臟病、神經(jīng)紊亂、生育與出生缺陷以及癌癥等。因此一種或幾種能夠精確檢測食品中維生素B₁₂含量的方法十分重要。目前常用的主要有比色測定法、微生物營養(yǎng)缺陷型測定法、酶聯(lián)免疫吸附測定法、高效液相色譜法以及高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法等方法。需要考慮的因素有：動物性食品中維生素B₁₂同時有多種存在形式，如何準(zhǔn)確測定其真實(shí)含量。其次需要將結(jié)合態(tài)維生素B₁₂從鈷胺素結(jié)合蛋白中游離出來。還有維生素B₁₂在食品中含量較低，如何有效富集等問題。近期新發(fā)布的國標(biāo)《GB 5009.285-2022食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中維生素B12的測定》給我們提供了合適的解決方案。

我國現(xiàn)行的國標(biāo)為《GB 5413.14-2010 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒食品和乳品中維生素B12的測定》采用的是微生物法，僅適用于嬰幼兒食品、乳及乳制品中維生素B₁₂的檢測。國際現(xiàn)行方法也是微生物法，美國 AOAC 986.23方法即采用微生物法測定乳基嬰幼兒配方粉中的維生素B₁₂。此外AOAC 2011.10方法采用雙柱切換-液相色譜-紫外檢測法測定嬰兒配方奶粉和成人營養(yǎng)品中的維生素B₁₂。值得一提的是，在2010版國標(biāo)修訂征求意見稿中也曾將固相萃取-在線柱切換高效液相色譜法納入本標(biāo)準(zhǔn)，但未能出現(xiàn)在最新標(biāo)準(zhǔn)中。

新國標(biāo)解讀：

新國標(biāo)2022版第一法為液相色譜法，適用于嬰幼兒食品、乳及乳制品、肉及肉制品中維生素B₁₂的測定。因其檢測設(shè)備和耗材較為廉價、準(zhǔn)確度較高而值得推廣。第二法為液相色譜-質(zhì)譜法，適用于嬰幼兒食品、乳及乳制品、肉及肉制品、即食谷物、烘焙食品、果凍、飲料中維生素B₁₂測定。該方法是將分離性能優(yōu)異的液相色譜法與靈敏度更高、能提供相對分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)信息的質(zhì)譜法相結(jié)合的現(xiàn)代分離分析技術(shù)，同時結(jié)合使用我司獨(dú)立研發(fā)維生素B₁₂同位素內(nèi)標(biāo)，能對維生素B₁₂更加快速、準(zhǔn)確的定量，而且能解決飲料等低含量樣品的定量檢測難題。第三法仍為微生物法，適用于嬰幼兒食品、乳及乳制品中維生素B12的測定。

通過以上對比發(fā)現(xiàn)，新國標(biāo)2022版中增加了多種復(fù)雜的樣品基質(zhì)，提高了方法的適用性，通過使用高特異性的免疫親和柱以及維生素B₁₂同位素內(nèi)標(biāo)解決了當(dāng)前維生素B₁₂分析檢測的難題。在對應(yīng)的第一法前處理中，試樣經(jīng)酶解后，用氰化鉀（或氰化鈉）溶液將鈷胺素異構(gòu)體（羥鈷胺素、甲鈷胺素和5-脫氧腺苷鈷胺素等轉(zhuǎn)化為氰鈷胺素，樣液通過免疫親和柱凈化、濃縮后，反相液相色譜柱分離，紫外檢測器檢測。

 

維生素B₁₂及其內(nèi)標(biāo)的液相色譜-質(zhì)譜圖
 

在對應(yīng)第二法前處理中，稱取試樣后要先加入適量的同位素內(nèi)標(biāo)，再按第一法相同操作處理，最后由質(zhì)譜檢測器分析，因同位素內(nèi)標(biāo)的使用，可以有效地校正基質(zhì)效應(yīng)和前處理損失，使結(jié)果更加精確。
 

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