導(dǎo)讀

目前國內(nèi)市場上銷售的熱啟動Taq酶的品牌很多，但真正高質(zhì)量的熱啟動Taq酶并不多，面對這么多的熱啟動Taq酶產(chǎn)品，我們應(yīng)如何選擇？

首先，選擇擴增效率高的熱啟動Taq酶

耐受性好的Taq酶反應(yīng)體系經(jīng)優(yōu)化后，擴增效率在95%以上，即使是在目標基因含量較低時也能夠獲得滿意的擴增，在模板量較高時，也不易中毒，指數(shù)擴增期較長。耐受性能較差的Taq酶，即使反應(yīng)體系經(jīng)多次優(yōu)化，擴增效率仍達不到90%，擴增曲線“S”型不明顯，斜率較小，曲線低平。模板量較低時擴增不出來，較高時擴增效果也不理想。所以PCR擴增效率與Taq酶的性能密切相關(guān)，選擇高擴增效率的DNA聚合酶對PCR、qPCR能否成功至關(guān)重要。
 

其次，選擇酶動力強的熱啟動Taq酶

Taq酶的酶動力與擴增效率有關(guān)。一般熱啟動Taq酶的酶動力越強，PCR擴增的指數(shù)增長期越長，‘S型’曲線更加典型，熒光信號值更高，而且更適合做多重PCR檢測。酶動力弱的品牌DNA聚合酶一般只能支持2重反應(yīng)，在做3重反應(yīng)時，擴增曲線低矮，熒光信號值較低，無典型擴增曲線，結(jié)果很難判定。

 

最后，選擇靈敏度高的熱啟動Taq酶

一般說，DNA聚合酶的擴增效率高，靈敏度就高，但也有不一致的情況。如果要擴增的樣本目標基因豐度較低，建議對Taq酶的擴增靈敏度進行檢測。

Taq酶的擴增靈敏度進行檢測，常見的檢測方法是將目標基因質(zhì)粒片段進行10倍或5倍梯度稀釋，在較低的幾個稀釋度進行PCR檢測，選擇檢測靈敏度較高的熱啟動Taq酶。

由此可見，研究者需根據(jù)自己的實驗要求和經(jīng)費情況進行選擇，最好做一個梯度稀釋擴增實驗，以檢測熱啟動Taq酶的擴增效率和靈敏度。

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