實(shí)驗(yàn)過程中,如果沒有準(zhǔn)確的移液,您的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)將無(wú)法保證準(zhǔn)確 ,并且您的分析也會(huì)有較大差異,如何保證移液器的準(zhǔn)確度呢?
移液器的準(zhǔn)確度和精確度
移液器的準(zhǔn)確度和精確度是挑選移液器時(shí)重要指標(biāo)。準(zhǔn)確指移液量與設(shè)置量相等。精確是指多次移液結(jié)果接近一致。一般移液器會(huì)存在以下幾種情況:
■ 結(jié)果準(zhǔn)確但不精確:雖然平均移液量與設(shè)置量相符,但是單次移液結(jié)果之間互有偏差。
■ 結(jié)果精確但不準(zhǔn)確:移液結(jié)果之間只有微小差異,但是平均移液量與設(shè)置量相差甚遠(yuǎn)。
■ 結(jié)果準(zhǔn)確且精確:平均移液量與設(shè)置量相等,移液結(jié)果之間只有微小差異。
準(zhǔn)確度和精確度這兩個(gè)術(shù)語(yǔ)在移液器技術(shù)參數(shù)中表現(xiàn)為系統(tǒng)誤差 %(不準(zhǔn)確度 %)和隨機(jī)誤差 %(不精確度 %)。值得注意的是,通常只有當(dāng)匹配原廠吸頭使用時(shí)技術(shù)參數(shù)才會(huì)有效。使用具有高品質(zhì)、經(jīng)專業(yè)維護(hù)和校準(zhǔn)的移液器,以及合適的高品質(zhì)吸頭才能取得最好的準(zhǔn)確度。另一方面,移液經(jīng)驗(yàn)和實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范對(duì)精確度有很大的影響,比如正確的移液角度、最佳移液速度以及一致的移液節(jié)奏等因素。
為了取得高水平的準(zhǔn)確度,應(yīng)選擇能夠操作所涉及容量中最小容量的移液器。這一點(diǎn)很重要,因?yàn)榕乓喝萘拷咏埔浩髯钚∪萘繒r(shí),移液器的準(zhǔn)確度會(huì)降低。例如,分配 10μl 的液體時(shí),使用 1 ml 容量的移液器會(huì)產(chǎn)生相當(dāng)差的準(zhǔn)確度,而使用 300 μl 的移液器效果則會(huì)好一些,使用 10μl 的移液器則會(huì)產(chǎn)生理想的效果。
為了取得良好的移液結(jié)果,務(wù)必選擇具有較小移液力、吸頭安裝力、吸頭彈出力的移液器。移液力大的移液器會(huì)加速手臂和手部肌肉的疲勞,尤其是在長(zhǎng)期移液工作期間,從而導(dǎo)致更為不理想的結(jié)果。所以購(gòu)買移液器時(shí)您可以按照以下特點(diǎn)進(jìn)行選擇,這些都會(huì)影響到移液結(jié)果的可靠性:
■ 針對(duì)各種液體都可以輕松校準(zhǔn)。如果設(shè)定可以保存待用也是有益的。
■ 容量調(diào)節(jié)鎖定:這個(gè)功能可以防止移液時(shí)出現(xiàn)意外的容量改變。應(yīng)特別留意該機(jī)制的可靠性、人體工學(xué)設(shè)計(jì)以及靈敏性。
■ 移液器或移液器帽的顏色標(biāo)識(shí):這可以幫助您選取正確的移液吸頭。
移液器屬于精密儀器,所以做好移液器的維護(hù),解它們的工作原理,熟練掌握移液器的使用技術(shù),才能保證
移液器準(zhǔn)確度。
移液器的工作原理
1. 空氣置換型移液器
空氣置換移液器的工作原理有點(diǎn)像注射器,不同之處在于活塞和樣品之間有一個(gè)充氣墊。氣墊可防止活塞與溶液接觸。將溶液和移液管分開是好的,但它也對(duì)移液器施加了一些限制。
溫度和壓力會(huì)影響氣墊的體積,從而影響移液精度。此外,揮發(fā)性溶劑會(huì)蒸發(fā)到氣墊中,從而導(dǎo)致分配體積不準(zhǔn)確且低于移液器上顯示的體積。
空氣置換移液器的內(nèi)管也容易受到移液溶液的污染。所以,盡量不要吸取腐蝕性液體。
2. 非空氣置型換移液器
非空氣置型換移液器也被成為容積式移液器。容積式移液器的工作原理也類似于注射器的工作,但它們沒有氣墊。這使得它們?cè)谝迫]發(fā)性溶劑時(shí)更準(zhǔn)確,因?yàn)闆]有地方(氣墊)讓溶劑蒸發(fā)。這也降低了移取腐蝕性物質(zhì)和生物危險(xiǎn)材料時(shí)受到污染的機(jī)會(huì),這使得容積式移液器更適合處理這些試劑。這種移液器一般造價(jià)昂貴,因?yàn)橐埔浩骱臀^是一個(gè)單元,移液時(shí)都需要更換。當(dāng)然,還有一種辦法是使用外置活塞式移液器,這種移液器可用來(lái)吸取石油等黏稠液體及揮發(fā)、腐蝕性較強(qiáng)的液體。比如瑞寧的 Pos-D外置活塞式移液器。
保持移液器準(zhǔn)確度的方法:
1. 定期進(jìn)行移液器的維護(hù)和保養(yǎng)
從理論上講,移液器的維護(hù)保養(yǎng)頻率應(yīng)維持在,每 6-12 個(gè)月/次。這只是一個(gè)粗略的指南;根據(jù)您對(duì)準(zhǔn)確性的要求,您需要更頻繁地對(duì)其進(jìn)行維修。這項(xiàng)工作,可以自行完成,也可以交給售后服務(wù)進(jìn)行,據(jù)了解,Rainin系列移液器一般會(huì)為客戶提供定期免費(fèi)維護(hù)、校準(zhǔn)移液器等售后服務(wù)。正常的移液器維護(hù)校準(zhǔn)包括移液器的初校準(zhǔn)、清理、給易損部件加潤(rùn)滑脂以及更換任何磨損的密封件或其他部件。
2. 每次實(shí)驗(yàn)前做好移液器的點(diǎn)檢工作
檢查移液器的前端是否有任何明顯的損壞。如果出現(xiàn)問題,請(qǐng)及時(shí)報(bào)修,切勿帶故障工作。
3. 每天使用前需要清潔移液器
應(yīng)該用一些 70% 的乙醇擦拭移液器。
4. 使用移液器支架垂直存放移液器
以這種方式存放移液器可防止移液器桶中的任何液體進(jìn)入移液器內(nèi)部并導(dǎo)致腐蝕。
5. 切勿將移液器放在吸頭有液體的一側(cè)
使用過程中只有空氣才能將液體與移液管分開。所以移液管內(nèi)的任何液體都有可能導(dǎo)致污染,甚至?xí)䦟?dǎo)致液體倒吸而造成嚴(yán)重的腐蝕損壞。
6. 保證吸頭的匹配度及正確安裝
在吸取和分配液體時(shí),不匹配或安裝不當(dāng)?shù)奈^會(huì)導(dǎo)致空氣逸出,從而導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確。
7. 需要保證正確使用移液器
關(guān)于移液器使用的有關(guān)基礎(chǔ)知識(shí),請(qǐng)查看
Rainin移液技術(shù)手冊(cè)。移液器的正確使用需要遵循以下原則:
①移液器動(dòng)作緩慢、平穩(wěn);
②吸取液體時(shí)垂直握住移液器;
③吸取液體時(shí),只需將吸頭稍微浸入液體即可。否則,您會(huì)在吸頭上涂上液體,液體將隨移液器內(nèi)的體積一起轉(zhuǎn)移;
④分配液體時(shí),垂直握住移液器,但使接收容器的側(cè)壁保持 45 度角。移液器靠在側(cè)壁上或移入已經(jīng)存在的液體中。
8. 移液的準(zhǔn)確度的預(yù)測(cè)
其實(shí)你移液器操作技術(shù)是可以檢測(cè)的.具體方法如下:通過將 100 µL 分配到精細(xì)天平上來(lái)檢查您的移液技術(shù)的準(zhǔn)確性。您制作的液滴的質(zhì)量應(yīng)約為 0.1 克。現(xiàn)在重復(fù)做同樣的步驟 10 次并記錄你獲得的質(zhì)量。如果變化超過 +/-0.5%,那么您要么需要重新評(píng)估您的移液技術(shù),要么多加練習(xí)!
蘇州阿爾法生物為您提供移液器、移液器支架、外置活塞式移液器、移液器吸頭等儀器耗材,更多關(guān)于移液器保養(yǎng)、移液器校準(zhǔn)、移液器維護(hù)及
移液器準(zhǔn)確度相關(guān)知識(shí)。