顯微鏡在病毒分離中的應用
新冠未平，猴痘又起，2019年底的新冠已經肆虐2年多了，還未結束，新的一場潛在流行又開始若隱若現，這就是猴痘病毒。
猴痘是痘病毒科正痘病毒屬的一種。猴痘是一種罕見的病毒性人畜共患�。◤膭游飩鞑ソo人的病毒），病人癥狀與過去在天花病人身上所觀察到的相似，但臨床嚴重程度較輕。隨著在1980年消滅了天花和隨后停止接種天花疫苗，猴痘成為最嚴重的正痘病毒。1在非洲中部和西部地區(qū)熱帶雨林仍有猴痘散發(fā)病例。在沉寂了多年之后，在2022年初猴痘病毒再次進入到大家的視野。具路透財經早報報道，世界衛(wèi)生組織(WHO)周五召開緊急會議，討論最近爆發(fā)的猴痘疫情，此前歐洲公布有100多例確診或疑似病例。德國稱這是歐洲有史以來最大的猴痘疫情，至少有九個歐洲國家－比利時、法國、德國、意大利、荷蘭、葡萄牙、西班牙、瑞典和英國－以及美國、加拿大和澳大利亞報告了病例。世衛(wèi)組織稱，科學家們正在對不同病例的病毒進行研究，看看它們是否有關聯，預計將很快提供最新消息。2
而對病毒進行研究首先需要對病毒分離，分離的常見方法是將從病人處取樣后的病毒感染宿主，其可以是動物、雞胚或細胞株，而較之前二者的成本、生長環(huán)境的復雜性和易用性，細胞株現在是最常用的宿主。
以新冠病毒的分離為例，將狀態(tài)良好的Vero E6和Huh-7細胞分別接種于96孔細胞培養(yǎng)板，培養(yǎng)24 h后備用。凍存的鼻/咽拭子標本放置于冰上升溫而融化。棄96孔細胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)液，每孔加入標本液25 μL；每個標本分別接種2類細胞系。另外，每個細胞系設2個對照孔，每孔僅加入25 μL維持液。將接種好的細胞培養(yǎng)板于5% CO2、37 ℃培養(yǎng)箱中孵育2 h。然后棄接種的標本液，每孔加入100 μL DMEM維持液, 放置5% CO2、37 ℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，每日觀察細胞病變。如有細胞病變，則在80%以上細胞單層被破壞時，收取細胞培養(yǎng)物。對沒有出現的病變細胞，收取上清液，按類似方法盲傳2代，并對細胞培養(yǎng)物進行實時熒光定量聚合酶鏈反應(real time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，熒光定量RT-PCR)檢測還可以利用反轉錄酶合成cDNA后進行測序。3
在對細胞進行培養(yǎng)和感染過程中需要對活細胞的狀態(tài)快速檢驗，確保在合適的時機進行傳代和收獲病變的細胞。而在此用途的睿智之選就是徠卡顯微系統(tǒng)的 DMi1倒置顯微鏡。首先其可以靈活地切換S40聚光鏡（40-50mm工作距離）和S80聚光鏡（80mm工作距離）。其次，高品質的徠卡物鏡，提供色彩鮮明的圖像。再次，深思熟慮的設計以及質量控制元件，使用者即使面對冗長的工作，仍然可以舒適地工作。在其做相襯觀察時，使 用 簡 便， 只 需 輕松旋轉物鏡轉換盤，即可在10x至20x至40x相襯之間切換。無需改變相襯插板中的相襯環(huán)——PH1相襯環(huán)匹配全部三種物鏡！且智能功能使的工作流程順暢、高效，節(jié)省了時間和資源。最后，徠卡顯微系統(tǒng)的高品質成像技術提供精準的結果，降低出錯的風險。顯微鏡的LED照明意味著低能源成本以及最小的停工時間。無需經常更換燈泡，或等待達到合適的色溫。除了上述介紹的光學和機械設計，DMi1還有相機版本，其是圖像采集和細胞培養(yǎng)存檔的一體式解決方案。您可以在250萬或500萬像素分辨率之間選擇。機安裝在支架背面。無需額外的三目鏡筒，可獲清晰視圖及輕松進入工作區(qū)域。使用遙控采集圖像甚至視頻。數據直接存儲在SD卡上，無需使用電腦。相機可連接任意HDMI顯示器，與同事或學生一起進行討論。HDMI端口可在屏幕上提供優(yōu)質的圖像。若需要測量和批注，提煉圖像分析，系統(tǒng)中包含用于PC的徠卡應用套件（LAS）軟件的核心版本可以完成此項工作。DMi1還是在中國生產的具有百年德國光學傳承的產品，兼顧品質和成本優(yōu)勢，為了方便臨床使用還專門有醫(yī)療器械注冊證：滬械注準20202220450。
2019-2022在接連的各種高傳染力的病毒輪番上陣之時，徠卡顯微系統(tǒng)有專門的解決方案為病毒的研究保駕護航。
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相關產品：
DMi1倒置顯微鏡
了解更多：徠卡顯微
猴痘是痘病毒科正痘病毒屬的一種。猴痘是一種罕見的病毒性人畜共患�。◤膭游飩鞑ソo人的病毒），病人癥狀與過去在天花病人身上所觀察到的相似，但臨床嚴重程度較輕。隨著在1980年消滅了天花和隨后停止接種天花疫苗，猴痘成為最嚴重的正痘病毒。1在非洲中部和西部地區(qū)熱帶雨林仍有猴痘散發(fā)病例。在沉寂了多年之后，在2022年初猴痘病毒再次進入到大家的視野。具路透財經早報報道，世界衛(wèi)生組織(WHO)周五召開緊急會議，討論最近爆發(fā)的猴痘疫情，此前歐洲公布有100多例確診或疑似病例。德國稱這是歐洲有史以來最大的猴痘疫情，至少有九個歐洲國家－比利時、法國、德國、意大利、荷蘭、葡萄牙、西班牙、瑞典和英國－以及美國、加拿大和澳大利亞報告了病例。世衛(wèi)組織稱，科學家們正在對不同病例的病毒進行研究，看看它們是否有關聯，預計將很快提供最新消息。2
而對病毒進行研究首先需要對病毒分離，分離的常見方法是將從病人處取樣后的病毒感染宿主，其可以是動物、雞胚或細胞株，而較之前二者的成本、生長環(huán)境的復雜性和易用性，細胞株現在是最常用的宿主。
以新冠病毒的分離為例，將狀態(tài)良好的Vero E6和Huh-7細胞分別接種于96孔細胞培養(yǎng)板，培養(yǎng)24 h后備用。凍存的鼻/咽拭子標本放置于冰上升溫而融化。棄96孔細胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)液，每孔加入標本液25 μL；每個標本分別接種2類細胞系。另外，每個細胞系設2個對照孔，每孔僅加入25 μL維持液。將接種好的細胞培養(yǎng)板于5% CO2、37 ℃培養(yǎng)箱中孵育2 h。然后棄接種的標本液，每孔加入100 μL DMEM維持液, 放置5% CO2、37 ℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，每日觀察細胞病變。如有細胞病變，則在80%以上細胞單層被破壞時，收取細胞培養(yǎng)物。對沒有出現的病變細胞，收取上清液，按類似方法盲傳2代，并對細胞培養(yǎng)物進行實時熒光定量聚合酶鏈反應(real time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，熒光定量RT-PCR)檢測還可以利用反轉錄酶合成cDNA后進行測序。3
在對細胞進行培養(yǎng)和感染過程中需要對活細胞的狀態(tài)快速檢驗，確保在合適的時機進行傳代和收獲病變的細胞。而在此用途的睿智之選就是徠卡顯微系統(tǒng)的 DMi1倒置顯微鏡。首先其可以靈活地切換S40聚光鏡（40-50mm工作距離）和S80聚光鏡（80mm工作距離）。其次，高品質的徠卡物鏡，提供色彩鮮明的圖像。再次，深思熟慮的設計以及質量控制元件，使用者即使面對冗長的工作，仍然可以舒適地工作。在其做相襯觀察時，使 用 簡 便， 只 需 輕松旋轉物鏡轉換盤，即可在10x至20x至40x相襯之間切換。無需改變相襯插板中的相襯環(huán)——PH1相襯環(huán)匹配全部三種物鏡！且智能功能使的工作流程順暢、高效，節(jié)省了時間和資源。最后，徠卡顯微系統(tǒng)的高品質成像技術提供精準的結果，降低出錯的風險。顯微鏡的LED照明意味著低能源成本以及最小的停工時間。無需經常更換燈泡，或等待達到合適的色溫。除了上述介紹的光學和機械設計，DMi1還有相機版本，其是圖像采集和細胞培養(yǎng)存檔的一體式解決方案。您可以在250萬或500萬像素分辨率之間選擇。機安裝在支架背面。無需額外的三目鏡筒，可獲清晰視圖及輕松進入工作區(qū)域。使用遙控采集圖像甚至視頻。數據直接存儲在SD卡上，無需使用電腦。相機可連接任意HDMI顯示器，與同事或學生一起進行討論。HDMI端口可在屏幕上提供優(yōu)質的圖像。若需要測量和批注，提煉圖像分析，系統(tǒng)中包含用于PC的徠卡應用套件（LAS）軟件的核心版本可以完成此項工作。DMi1還是在中國生產的具有百年德國光學傳承的產品，兼顧品質和成本優(yōu)勢，為了方便臨床使用還專門有醫(yī)療器械注冊證：滬械注準20202220450。
2019-2022在接連的各種高傳染力的病毒輪番上陣之時，徠卡顯微系統(tǒng)有專門的解決方案為病毒的研究保駕護航。
其他應用鏈接:
- https://www.who.int/zh/news-room/fact-sheets/detail/monkeypox
- https://mp.weixin.qq.com/s/PcJcp5SWTxJpbmYkJbQqBg
- ZHANG Ron, et.al. Isolation of a 2019 novel coronavirus strain from a coronavirus disease 2019 patient in Shanghai[J]. Journal of Microbes and Infections, 2020, 15(1): 16-21
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