一提到細(xì)胞培養(yǎng)，這是多少實(shí)驗(yàn)者的噩夢，簡直……說多了都是淚。

小編經(jīng)過軟磨硬泡終于從師兄師姐那里討到了細(xì)胞培養(yǎng)秘籍，今天就大方一回，分享給大家。

★ 血清與培養(yǎng)基的選擇

一般實(shí)驗(yàn)血清的添加比例為10%，也可根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)和生長速率適當(dāng)增加或減少添加比例。

對于培養(yǎng)基，建議選擇商品化的，比較成熟，穩(wěn)定性也較好。

★ 培養(yǎng)瓶的選擇

目前商品化的細(xì)胞培養(yǎng)瓶主要為瓶蓋是否帶氣孔兩種。其中不帶透氣孔細(xì)胞培養(yǎng)瓶擰緊后需適當(dāng)回旋瓶蓋，保證CO₂能順利進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

細(xì)胞培養(yǎng)過程中，對于適應(yīng)能力強(qiáng)的腫瘤細(xì)胞，可在傳代3-4次后更換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶。對于非腫瘤細(xì)胞系如293T等細(xì)胞，建議每次傳代更換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶來保證細(xì)胞狀態(tài)。

★ 細(xì)胞傳代

傳代時(shí)通常使用胰酶消化法。該方法又分為干消化法和濕消化法。

▶  濕消化法：待細(xì)胞變圓，成流沙狀脫落時(shí)即可加入新鮮培養(yǎng)基終止消化，1000rpm離心5min，棄去上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸傳代。

▶  干消化法：胰酶浸潤后棄去胰酶，待細(xì)胞變圓后加入新鮮培養(yǎng)基吹下后再進(jìn)行細(xì)胞傳代。

不同細(xì)胞的細(xì)胞間連接強(qiáng)度不一樣，消化時(shí)間不同；不同細(xì)胞的貼壁能力不同，消化時(shí)間不同；消化時(shí)應(yīng)觀察細(xì)胞形態(tài)，避免因過度消化影響細(xì)胞活性。

★ 細(xì)胞凍存與復(fù)蘇

當(dāng)細(xì)胞生長狀況較好或者代數(shù)較早時(shí)，需及時(shí)大量的凍存。

細(xì)胞凍存密度通常為1-3×10⁶個(gè)/ml。通常4℃放置0.5h，-20℃放置2h，-80℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。

細(xì)胞復(fù)蘇38℃水浴不時(shí)搖動(dòng)，在1分鐘內(nèi)使其完全融化，1000rpm離心5min,棄去上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸移入培養(yǎng)瓶中。

★ 污染防控

細(xì)胞培養(yǎng)最基本的是做好污染防控，包括微生物污染的防控和細(xì)胞系間交叉污染的防控。

實(shí)驗(yàn)中需保持良好的操作習(xí)慣，所用材料的位置擺放要順手，污染源和已滅菌物品要分開放置。實(shí)驗(yàn)室也需定期清潔與消毒。

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