皮膚為人體最大的器官，成纖維細(xì)胞是皮膚真皮層中主要細(xì)胞，而且是人體最容易獲得的體細(xì)胞。人皮膚成纖維細(xì)胞不但能夠促進(jìn)表皮細(xì)胞的遷移、增殖和分化，還能分泌大量的膠原蛋白、彈性纖維蛋白及多種細(xì)胞修復(fù)因子，具有強(qiáng)大的自我更新能力，從而修復(fù)老化的皮膚。因此，已廣泛應(yīng)用于抗皮膚衰老、整形外科、組織工程皮膚等領(lǐng)域。

人成纖維細(xì)胞取材于健康的人體，臨床標(biāo)本經(jīng)過徹底清洗避免污染，真皮層盡可能剪碎有利于成纖維細(xì)胞的遷出。形態(tài)上，成纖維細(xì)胞呈梭型或不規(guī)則三角形，中央有卵圓形核，胞質(zhì)突起，生長時(shí)呈放射狀。體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞多為梭形、多角形和扁平星形等，其形態(tài)尚可依細(xì)胞的功能變化及其附著處的物理性狀不同而發(fā)生改變。
 

人成纖維細(xì)胞形態(tài)

⭐ 下面介紹人成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)方法

✔ 材料準(zhǔn)備

◆ OriCell®人成纖維細(xì)胞（貨號(hào)HXXFB-00001）

◆ OriCell®人成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基（貨號(hào)HXXFB-90011，套裝內(nèi)含基礎(chǔ)培養(yǎng)基、優(yōu)級(jí)胎牛血清和培養(yǎng)添加物）

✔ 實(shí)驗(yàn)步驟

（1）水浴鍋37℃預(yù)熱。完全培養(yǎng)基溫浴到37℃。在15mL離心管中加入5mL以上完全培養(yǎng)基備用。

（2）從-80℃冰箱中取出細(xì)胞，放入37℃水浴鍋中，快速晃動(dòng)，使凍存液迅速融化。注意融化過程必須晃動(dòng)凍存管，保證凍存液融化迅速、均勻；且晃動(dòng)時(shí)應(yīng)避免水沒過管蓋造成污染；管內(nèi)凍存液融化至只剩一個(gè)約2mm直徑的冰晶時(shí)，即停止水浴。繼續(xù)晃動(dòng)凍存管，至冰晶融化。

（3）用75%醫(yī)用酒精擦拭凍存管外表面。

（4）在超凈臺(tái)中打開凍存管，用巴氏吸管或移液槍吸取細(xì)胞凍存懸液，轉(zhuǎn)移至先前準(zhǔn)備的離心管中。

（5）用1mL完全培養(yǎng)基洗滌凍存管1次，收集殘留細(xì)胞，減少損失。

（6）細(xì)胞懸液以250×g，離心4min。

（7）離心后去除上清。加入2mL完全培養(yǎng)基，輕柔吹打細(xì)胞沉淀，充分吹散、混勻。

（8）將細(xì)胞接種到1個(gè)T25培養(yǎng)瓶或底面積相當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)容器中。加入足量完全培養(yǎng)基，1個(gè)T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基總量不少于5 mL。

（9）搖勻細(xì)胞，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的CO2培養(yǎng)箱中。注意接種2h內(nèi)不可移動(dòng)、觀察細(xì)胞。這會(huì)嚴(yán)重影響細(xì)胞貼壁，造成狀態(tài)不佳、細(xì)胞聚團(tuán)、貼壁不均勻等情況。

（10）復(fù)蘇次日，觀察細(xì)胞狀態(tài)，并更換新鮮的完全培養(yǎng)基或傳代。

（11）之后，每2天更換一次完全培養(yǎng)基，直到細(xì)胞生長至90%匯合，即需傳代。通常OriCell®人成纖維細(xì)胞傳代比例為1:3，72h內(nèi)生長至可傳代匯合度。請(qǐng)根據(jù)細(xì)胞實(shí)際生長情況調(diào)整傳代比例。

⭐ 小TIP

✔ 培​養(yǎng)人成纖維細(xì)胞對(duì)于細(xì)胞密度有較高的要求，我們建議有條件且計(jì)數(shù)效率較高的情況下，進(jìn)行手工計(jì)數(shù)，以期獲得精準(zhǔn)的細(xì)胞濃度指導(dǎo)接種；在沒有精確計(jì)數(shù)條件的情況下，按照適宜比例傳代是更好的方法。

✔ 正常情況下OriCell®人成纖維細(xì)胞每代生長時(shí)間不超過72h，中途不需要換液。頻繁換液會(huì)破壞構(gòu)建起的細(xì)胞微環(huán)境。

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