臍帶血是指胎兒出生時臍帶內及胎盤近胎兒一側血管內的血液。臍帶血單個核細胞（Cord Blood Mononuclear Cell，CBMC) 分離自正常人胎盤臍帶組織，是臍帶血中具有單個核的細胞，包括淋巴細胞和單核細胞等，是機體防御系統(tǒng)的一個重要組成部分。
 

1    原理

單個核細胞的體積、形態(tài)和比重與其它細胞不同，在沉降過程中不同比重的細胞會處于不同的分布位置。因此，可利用各種血細胞和單個核細胞比重之間的差異將各種血細胞與單個核細胞分離開來。
 

2    方法

1）  取新鮮抗凝臍帶血，按照1：1比例加入RPMI 1640培養(yǎng)基，將血液進行稀釋（以降低血液粘稠度），輕柔混勻，備用。

2）  向無菌離心管內加入適量的單個核細胞分離液，將稀釋后的臍帶血平鋪到分離液液面上方（分離液：稀釋臍帶血=1：2），保持兩液面界面清晰。

3）  800g，室溫，離心 20min-30min（注：設置較慢的加速度和減速度，如果有十檔，設為第三檔）。

4）  離心結束后，吸棄血漿層，小心吸取CBMC層（即白膜層）并轉移至15mL離心管中。離心結束后，管內液面從上至下依次為稀釋血漿層、CBMC層、分離液層和紅細胞層（見圖1）。

圖1 稀釋臍帶血離心前后的分層狀態(tài)圖
 

5）  向離心管中加入10mL 的RPMI 1640培養(yǎng)基洗滌細胞，250g，室溫離心 10min ，棄上清。重復該步驟 1~2 次，即可用于后續(xù)試驗。
 

3    注意事項

1）  血液新鮮程度是影響分離效果的關鍵因素，請盡量使用采集后24h內的血液進行CBMC分離。

2）  為保證細胞的活力，整個操作過程請輕柔，避免對細胞造成機械性的損傷。

3）  為保持細胞狀態(tài)良好，請盡量縮短整個試驗的周期。
 

4    臍帶血單個核細胞分離試劑盒

IPHASE/匯智和源針對人臍帶血單個核細胞分離的特點，開發(fā)了人臍帶血單個核細胞分離試劑盒。該試劑盒包含單個核細胞分離液和洗滌液兩個組分，各成分對細胞無毒性，不會影響細胞的原始狀態(tài)；同時，該試劑盒操作簡單便捷，可大大縮短細胞分離時間，分離所得細胞純度高、狀態(tài)好、得率高。
 

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