在大多數(shù)干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究中，誘導(dǎo)分化成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞已經(jīng)成為鑒定其分化潛能的金標(biāo)準(zhǔn)。

上期我們分享了成骨誘導(dǎo)分化的操作（點(diǎn)這里回顧），本期輪到成脂誘導(dǎo)分化操作啦！

成脂誘導(dǎo)分化
脂肪組織由脂肪細(xì)胞組成，對(duì)保持能量和代謝平衡非常重要。脂肪組織有兩種，一種為白色脂肪組織（WAT），主要分布在皮下和內(nèi)臟，內(nèi)臟白色脂肪與肥胖、病理驗(yàn)證和胰島素抵抗相關(guān)，皮下白色脂肪則可提高葡萄糖耐受性；另一種為棕色脂肪組織（BAT），主要呈離散狀分布在脊椎旁、鎖骨和腎上腺，功能是產(chǎn)熱。這兩種脂肪組織有相同的分化特征，都是由間充質(zhì)干細(xì)胞分化而來(lái)。

體外誘導(dǎo)成脂分化的鑒定
1.檢測(cè)成脂誘導(dǎo)后細(xì)胞的胞漿中的油滴（脂肪滴）。脂肪滴經(jīng)油紅O染色后在顯微鏡下呈現(xiàn)顯著的紅色，未分化細(xì)胞則無(wú)明顯顏色。通過(guò)統(tǒng)計(jì)各樣品中成脂分化細(xì)胞的百分比來(lái)對(duì)成脂分化強(qiáng)弱加以表征對(duì)比。

2.MSC成脂分化后有明顯的成脂特征性基因表達(dá)，如LPL、PPARγ等�？墒褂肦T-PCR通過(guò)對(duì)相關(guān)基因表達(dá)量的測(cè)量，對(duì)比不同實(shí)驗(yàn)組別的成脂分化差異。     

OriCell^®人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)分化油紅O染色效果

OriCell^®小鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)分化油紅O染色效果

OriCell^®小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)分化油紅O染色效果

實(shí)操走起
01 所需材料
1. OriCell^® 間充質(zhì)干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)分化試劑盒（套裝內(nèi)A、B液成分含基礎(chǔ)培養(yǎng)基、優(yōu)級(jí)胎牛血清、成脂誘導(dǎo)添加物；油紅O染色液、明膠）

2. OriCell^® Phosphate-Buffered Saline (1×PBS)（貨號(hào)：PBS-10001）

02 誘導(dǎo)分化操作步驟
（注：A、B液配置方法詳見(jiàn)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)）

1.加1mL 0.1%明膠到六孔板中，搖勻，使其能均勻覆蓋各孔底面。

2. 將鋪有0.1%明膠的六孔板放置在超凈臺(tái)或CO₂培養(yǎng)箱至少30min。

3. 30min后吸去明膠即可用于接種細(xì)胞，或等待六孔板晾干再接種。

4. 將待誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞按照 2×10⁴cells/cm²的細(xì)胞密度接種于六孔板中，每孔加入2mL普通完全培養(yǎng)基。

5. 細(xì)胞置于37℃、5%CO₂、飽和濕度的CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

6. 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到100%時(shí)，小心地將孔內(nèi)完全培養(yǎng)基吸走，向六孔板中加入2mL OriCell^® 間充質(zhì)干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基A液。

7. 誘導(dǎo)3天后，吸去六孔板中的A液，加入2mL OriCell^® 間充質(zhì)干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基B液。

8. 維持1天后，吸去B液，換回A液進(jìn)行誘導(dǎo)。

9. A液和B液交替使用，期間需每天觀察細(xì)胞狀態(tài)。若在A液誘導(dǎo)過(guò)程中出現(xiàn)細(xì)胞收縮、死亡的情況，請(qǐng)及時(shí)更換為B液，直至細(xì)胞狀態(tài)恢復(fù)。

10.重復(fù)誘導(dǎo)和維持過(guò)程，直到出現(xiàn)足量、大小適宜的脂滴，即可準(zhǔn)備染色。

03 油紅O染色

1.成脂誘導(dǎo)分化結(jié)束后，吸去六孔板中的成脂誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基，用1×PBS輕柔洗滌2~3次。

2. 每孔加入2mL 4%多聚甲醛溶液（或 10%福爾馬林），室溫，固定30min。

3. 按油紅O貯存液：蒸餾水=3：2，配制為工作液�；靹蚝�250×g離心4min，使用上清。

4. 吸去固定液，用1×PBS輕柔洗滌2~3次，確保將固定液清洗徹底。

5. 每孔加入2 mL油紅O染料工作液，室溫染色 30 min。

6. 吸去油紅O染色液，用1×PBS輕柔洗滌2~3 次，充分洗去染色液。

7. 每孔加入2 mL 1×PBS，將培養(yǎng)板置于顯微鏡下觀察成脂染色效果。

8. 染色后的六孔板用封口膜封裝后，置于4℃保存，但不要超過(guò)1周。脂滴會(huì)相互融合，無(wú)法保持染色時(shí)的狀態(tài)。

注意事項(xiàng)

1、本操作規(guī)程以六孔板為例，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況選用合適的培養(yǎng)容器；

2、為減少誘導(dǎo)過(guò)程細(xì)胞漂起、不貼壁，建議使用明膠包被培養(yǎng)容器；

3、誘導(dǎo)培養(yǎng)基在使用前均需預(yù)熱至 37℃；

4、A液刺激脂滴形成；B液維持已形成的脂滴，并促進(jìn)脂滴增大；

5、通常情況下，按照“A液3天，B液1天”的使用方式即可順利誘導(dǎo)細(xì)胞成脂；

6、各類、各批次細(xì)胞在誘導(dǎo)過(guò)程中可能出現(xiàn)多種情況，請(qǐng)靈活調(diào)整A、B液的使用比例；

7、為防止脂滴脫落，所有操作盡可能輕緩。

依賴于成熟的干細(xì)胞技術(shù)平臺(tái)，我們可以為您開(kāi)展多種干細(xì)胞分化潛能研究的實(shí)驗(yàn)服務(wù)。其中針對(duì)特定種屬優(yōu)化定制的誘導(dǎo)分化試劑盒，可向成骨、成脂、成軟骨、成肝等多個(gè)方向誘導(dǎo)，性能穩(wěn)定，誘導(dǎo)分化效果好！同時(shí)，我們可以按照您提供的誘導(dǎo)試劑和誘導(dǎo)方法為您完成特定的干細(xì)胞誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)，也可以按照您的目的和要求，在各種干細(xì)胞誘導(dǎo)途徑中為您探索出一套相對(duì)完善的方法。