為進一步提高感染性疾病相關個體化醫(yī)學檢測，2017年12月1日，國家衛(wèi)計委發(fā)布了最新版的感染性疾病相關個體化醫(yī)學分子檢測技術(shù)指南。新版的感染性疾病個體化醫(yī)學分子檢測技術(shù)指南更側(cè)重在分子診斷層面，涉及到標本的采集，運輸，保存，實驗室設計，分子診斷方法介紹，試劑的選擇，設備的維護和校準，質(zhì)控品，結(jié)果報告，醫(yī)患溝通等全過程，給現(xiàn)今如火如荼的分子診斷檢測有一定的標桿作用，是行業(yè)的重要參考，有諸多的更新點。

乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、結(jié)核分枝桿菌和人類免疫缺陷病毒是目前個體化醫(yī)學檢測開展最廣泛的病原體，分子檢測主要包括病毒載量、耐藥檢測、基因型分型和相關人類基因多態(tài)性等。其中乙型肝炎病毒感染的分子診斷要點如下：

要點一：HBV DNA定量檢測

實時熒光定量PCR技術(shù)是目前HBV DNA載量檢測的主要方法，具有較高的靈敏度和較廣的線性范圍。核苷類似物治療患者：在治療12周時檢測HBV DNA水平以確定發(fā)生病毒性應答，之后每12-24周監(jiān)測1次。

要點二：HBV基因突變與耐藥

⑴ 與拉米夫定耐藥相關的變異：

拉米夫定與HBV DNA多聚酶YMDD序列結(jié)合，起到抑制病毒復制、降低HBV DNA水平的作用。HBV對拉米夫定最常見的耐藥變異就是YMDD變異。病毒出現(xiàn)變異耐藥后，應根據(jù)患者的個體情況改用其它抗病毒藥物治療，如干擾素及其它核苷類藥物。

⑵ 與阿德福韋酯耐藥相關的變異：

在長期接受阿德福韋酯治療的病例中發(fā)現(xiàn)的耐藥變異為N236T或A181V，但其發(fā)生率很低。所有拉米夫定耐藥株對阿德福韋酯均敏感，而阿德福韋酯耐藥株對拉米夫定也敏感。

(3) 與恩替卡韋耐藥相關的變異：

恩替卡韋可抑制拉米夫定耐藥病毒株的復制，但拉米夫定耐藥株對恩替卡韋敏感性低于野毒株，并且容易發(fā)生對恩替卡韋的耐藥。目前研究結(jié)果顯示，產(chǎn)生恩替卡韋耐藥性的先決條件是需要有拉米夫定耐藥變異。在拉米夫定耐藥變異株上，I169T、184A/G/I/S、S202G/I或M250V變異的出現(xiàn)，可形成對恩替卡韋的耐藥性。

⑷ 與替比夫定耐藥相關的變異：

替比夫定的耐藥屏障低，在基線病毒水平高和治療24周后仍能檢測到病毒的患者中，病毒耐藥發(fā)生率高。

要點三：常用的檢測方法

✔序列分析（測序法）DNA序列分析是檢測基因突變最直接可信的方法，是所有其他檢測變異技術(shù)的基礎。

DNA序列分析（Sanger測序）測序原理非�？茖W，過程縝密，結(jié)果真實可視，準確率達99.99%，不需要建庫，屬于直接測序，直接讀取數(shù)據(jù)，連續(xù)讀取目標片段，而不是針對某個位點，不需要推導結(jié)論，數(shù)據(jù)充分可信，是分子診斷領域的金標準。

✔實時熒光PCR技術(shù)，能計算突變株比例，是檢測慢性乙肝患者拉米夫定耐藥的有效手段。

✔微陣列技術(shù)，一種高通量的檢測新技術(shù)，具有大通量、快速、靈敏的優(yōu)勢，但有一定的假陽性和假陰性率，不能檢測出新位點的變異。

✔其他如質(zhì)譜技術(shù)，也可檢測目前我國臨床使用核苷酸藥物耐藥。

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乙肝病毒耐藥和分型檢測（Sanger測序法）
 

• 檢測常見的YMDD突變M204V/I，也可以同時獲得RT逆轉(zhuǎn)錄區(qū)的其他多個耐藥突變位點，包括有文獻支持的A181V/T，N236T，I169T，L180M，T184A/G/S/I/L/F，S202G/I，M250V/L/I，V173L，A194T，對未知耐藥位點和發(fā)生變異的病毒有很好的臨床和科研參考價值
• 檢測六種主要乙肝藥物（拉米夫定，替比夫定，恩替卡韋，恩曲他濱，阿德福韋和替諾福韋）的耐藥以及乙肝病毒分型信息
• 分子診斷技術(shù)金標準，耐藥和分型一步到位
• 國內(nèi)唯一獲得CFDA的Sanger測序法的乙肝耐藥分析檢測
• CFDA注冊證：國食藥監(jiān)械（準）字2014第3401444號