​葡萄酒是以新鮮葡萄或葡萄汁為原料，經(jīng)全部或部分發(fā)酵釀制而成的酒精飲料。其中富含酚類物質(zhì)，如花青素、黃酮醇、兒茶酸和酚酸等，可以有效地清除自由基，有很強(qiáng)的抗氧化能力，長(zhǎng)期適量飲用葡萄酒具有抑制冠心病、動(dòng)脈粥樣硬化、抗癌和抗炎癥等功效。

目前測(cè)定葡萄酒抗氧化性的方法有很多，如分光光度法、色譜法、毛細(xì)管凝膠電泳法等。而電子順磁共振波譜法是當(dāng)前用于研究生物和醫(yī)學(xué)體系中活潑自由基較為先進(jìn)和成功的方法之一，與其他方法比，具有樣品不受損、無(wú)干擾、靈敏度和分辨率高等優(yōu)點(diǎn)。國(guó)外利用這種方法針對(duì)抗氧化能力強(qiáng)的營(yíng)養(yǎng)保健食品，例如茶、啤酒、咖啡等進(jìn)行的相關(guān)研究已成為熱點(diǎn)。

揚(yáng)州大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院利用EPR技術(shù)對(duì)幾種原產(chǎn)地為中國(guó)的干紅葡萄酒進(jìn)行了研究，進(jìn)行了發(fā)酵后的抗氧化性分析試驗(yàn)和總酚檢測(cè)。通過(guò)不同單品種干紅葡萄酒總酚含量比較可知（圖1），5個(gè)單品種葡萄酒的總酚含量存在比較明顯的差異（P＜0.05），其中西拉和增芳德葡萄酒的總酚含量相對(duì)較低。取總酚含量最高的梅鹿輒干紅葡萄酒作為測(cè)試樣品，用蒸餾水稀釋100倍至800倍進(jìn)行EPR測(cè)試。由結(jié)果可知，稀釋100倍的樣品在5min時(shí)DPPH信號(hào)完全消失，說(shuō)明此時(shí)DPPH已被完全清除，而其他樣品仍有剩余，但信號(hào)完整。為保證實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性，選取200倍稀釋倍數(shù)作為實(shí)驗(yàn)條件。



圖2 不同稀釋倍數(shù)梅路輒干紅葡萄酒清除 DPPH 自由基的EPR波普?qǐng)D（反應(yīng) 5 min）

在不同反應(yīng)時(shí)間下對(duì)不同單品種干紅葡萄酒DPPH清除效果進(jìn)行比較可知，反應(yīng)5min時(shí)，5種不同的葡萄酒反應(yīng)體系中的剩余DPPH的信號(hào)值都有明顯的降低，而且各葡萄酒清除DPPH自由基的能力有明顯差異。（圖3）

圖3 不同單品種干紅葡萄酒 DPPH 自由基清除信號(hào) EPR 波普?qǐng)D（反應(yīng) 10min, 稀釋倍數(shù) 200 倍）

而當(dāng)實(shí)驗(yàn)時(shí)間進(jìn)行到10min時(shí)，其中梅鹿輒、寶石解百納和赤霞珠三種干紅葡萄酒樣品中DPPH信號(hào)基本消失，說(shuō)明這三種葡萄酒樣品中DPPH自由基已被幾乎完全清除，而且三種樣品的清除能力相差無(wú)幾。西拉和增芳德兩個(gè)樣品中DPPH信號(hào)仍保持完整，但是與5min時(shí)相比，信號(hào)值已有明顯下降，說(shuō)明樣品中抗氧化性物質(zhì)比5min時(shí)消耗的更多。
圖4 不同單品種干紅葡萄酒 DPPH 自由基清除信號(hào) EPR 波普?qǐng)D（反應(yīng) 10min, 稀釋倍數(shù) 200 倍）

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明DPPH清除率與總酚的變化趨勢(shì)基本一致。以這次實(shí)驗(yàn)的樣品數(shù)據(jù)擬合可以得知，干紅葡萄酒樣品的抗氧化性與其總酚含量呈正相關(guān)。此次實(shí)驗(yàn)所用的EPR技術(shù)可用于直接檢測(cè)各種未成對(duì)電子的自由基，不但可以很大程度上提高實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性、可靠性和信噪比，也對(duì)下一步研究葡萄酒對(duì)其他自由基（ABTS、OH自由基等）的清除作用提供了更多的可能性，有利于全面分析葡萄酒的抗氧化性。