RACE技術(shù)在基因工程抗體中的應(yīng)用

瀏覽次數(shù)：2862　發(fā)布日期：2020-10-28　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

前言

20世紀(jì)80年代后期，隨著分子生物學(xué)的迅速發(fā)展，使得人們可以通過基因工程技術(shù)對天然的分子進(jìn)行人為的改造，這為抗體藥物帶來了新的突破點(diǎn)和希望。了解和闡明抗體分子的結(jié)構(gòu)及功能，為人類疾病診斷及治療提供了新的推動力。

基因工程抗體

為了解決傳統(tǒng)的鼠源性單抗存在的弊端,對鼠源性單抗進(jìn)行改進(jìn)以及人源化單抗的研制成為單抗研究的主要方向，隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)的快速發(fā)展, 產(chǎn)生了第三代抗體制備技術(shù)，即基因工程抗體。主要包含嵌合抗體、改型抗體、完全人源化抗體、單鏈抗體、雙特異性抗體，常于用檢測和治療等方面。而RACE技術(shù)讓基因工程抗體的制備工作更加簡化便捷。

RACE技術(shù)

01

RACE技術(shù)定義
RACE技術(shù)即cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)（rapid amplification of cDNA ends），基于PCR從低豐度的轉(zhuǎn)錄本中快速擴(kuò)增cDNA的5'和3'末端的有效方法。通常用于已知中間片段序列，對未知兩端序列進(jìn)行擴(kuò)增的一項(xiàng)技術(shù)。

02

RACE和普通PCR在重組抗體中的應(yīng)用比較

普通PCR和RACE應(yīng)用比較

普通PCR在抗體基因擴(kuò)增中的應(yīng)用

RACE法在抗體基因擴(kuò)增中的應(yīng)用

普通PCR法在重組抗體中的應(yīng)用劣勢	RACE技術(shù)在重組抗體中的應(yīng)用優(yōu)勢
需要很多引物擴(kuò)增測試	RACE技術(shù)特別適合 IG famliy 很多的物種，例如小鼠、人等
N端序列無法精準(zhǔn)	可以獲得完整的抗體可變區(qū)序列，信號肽序列以及5' UTR區(qū)域
目前主要基于已知序列設(shè)計(jì)引物，無法完全覆蓋	RACE技術(shù)體系建立后，可以應(yīng)用于其它物種以及未知序列物種

制備基因工程抗體時(shí)需要進(jìn)行鼠雜交瘤擴(kuò)增，通常利用5’RACE技術(shù)。5’RACE技術(shù)的優(yōu)化將極大的提高基因工程抗體制備的成功率。華安生物進(jìn)行5’RACE時(shí)，常使用加尾法，根據(jù)接頭引物和自己設(shè)計(jì)特異引物，設(shè)計(jì)巢式PCR來進(jìn)行二次擴(kuò)增。

5’RACE技術(shù)原理