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來(lái)自噬菌體的驚喜--- M13 Antibody (HRP)

瀏覽次數(shù):4293 發(fā)布日期:2020-5-28  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
前言
2018年10月諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)的一半頒發(fā)給了美國(guó)科學(xué)家George P. Smith和英國(guó)科學(xué)家Gregory P. Winter, 兩人獲獎(jiǎng)的原因是多肽和抗體的噬菌體展示技術(shù)。噬菌體展示技術(shù)在生物醫(yī)藥研發(fā)中有著十分廣泛的應(yīng)用,是生物新藥研發(fā)的源頭技術(shù),M13噬菌體則被廣泛地應(yīng)用于噬菌體展示技術(shù)。M13的酶標(biāo)抗體,是在噬菌體展示技術(shù)篩選結(jié)果ELISA檢測(cè)中不可缺少的試劑。

M13噬菌體
M13噬菌體是一種絲狀噬菌體,內(nèi)有一個(gè)環(huán)狀單鏈DNA分子,長(zhǎng)6407個(gè)核苷酸,含DNA復(fù)制和噬菌體增殖所需的遺傳信息。M13 DNA的復(fù)制起始位點(diǎn)定位在基因間隔區(qū)內(nèi)。但是基因間隔區(qū)的有些核苷酸序列即使發(fā)生突變、缺失或插入外源DNA片段,也不會(huì)影響M13 DNA的復(fù)制,這為M13 DNA構(gòu)建克隆載體提供了條件。
 
噬菌體結(jié)構(gòu)
 
M13 噬菌體的生物學(xué)特性
M13 噬菌體顆粒是絲狀的,只感染F+(含F(xiàn)質(zhì)粒,能產(chǎn)生性菌毛)的大腸桿菌。感染宿主后通常不裂解宿主細(xì)胞,而是從感染的細(xì)胞中分泌出噬菌體顆粒,宿主細(xì)胞仍能繼續(xù)生長(zhǎng)和分裂。但生長(zhǎng)水平比未感染組低。
 
噬菌體侵染細(xì)菌的過(guò)程
 
M13噬菌體載體
單鏈 DNA 的酶切和連接是比較困難的,因此 M13 噬菌體在用作載體時(shí)是利用其雙鏈 RF DNA。RF DNA 很容易從感染細(xì)胞中純化出來(lái),可以象質(zhì)粒一樣進(jìn)行操作,并可通過(guò)轉(zhuǎn)化方法再次導(dǎo)入細(xì)胞。
在 M13 噬菌體基因組中絕大多數(shù)為必需基因,只有兩個(gè)間隔區(qū)可用來(lái)插入外源 DNA(基因 Ⅱ/Ⅳ 和基因 Ⅷ/Ⅲ 之間); Ⅱ 和基因 Ⅳ 之間的 508bp 間隔區(qū)是主要的外源片段插入位點(diǎn)。在基因 Ⅷ 和基因 Ⅲ 之間的小間隔區(qū)也可用來(lái)插入外源片段,但是在操作過(guò)程中,需要獲得感染細(xì)胞的菌落進(jìn)行影印篩選,比利用可見(jiàn)的噬菌斑方法更慢更麻煩; Ⅹ 也可用來(lái)克隆外源片段。
噬菌體載體結(jié)構(gòu)

M13噬菌體展示系統(tǒng)
M13噬菌體屬于單鏈環(huán)狀DNA病毒,其基因組為6.4 kb,編碼10種蛋白,其中5種為結(jié)構(gòu)蛋白,包括主要衣殼蛋白的PⅧ 和次要衣殼的pⅢ 、pⅥ 、PⅦ 和PⅨ 。其中,pⅢ 和PⅧ 是噬菌體展示中最常用的兩種蛋白,構(gòu)建了pⅢ 和PⅧ 展示系統(tǒng)。pⅢ 蛋白分子量為42 kDa,分布在噬菌體顆粒的一端。一般一個(gè)噬菌體有3-5個(gè)拷貝的pⅢ 蛋白,可在N端的柔性連接區(qū)插入外源蛋白或者多肽。pⅢ 系統(tǒng)的主要優(yōu)點(diǎn)是對(duì)展示的外源蛋白大小無(wú)嚴(yán)格的要求,該系統(tǒng)可以用來(lái)展示分子量較大的蛋白。PⅧ 蛋白的分子量為5.2 kDa,主要分布在噬菌體顆粒的兩側(cè)。由于該蛋白的分子量很小,只適合用來(lái)展示外源短肽。外源肽段的太大會(huì)影響病毒包裝,不能形成有功能的噬菌體。但由于pⅢ蛋白拷貝數(shù)較多,該系統(tǒng)比較適合用來(lái)篩選低親和力的配體。

 
M13酶標(biāo)抗體
華安生物專注于抗體的研發(fā)與生產(chǎn),擁有噬菌體展示技術(shù)抗體開(kāi)發(fā)平臺(tái),深刻了解M13酶標(biāo)抗體對(duì)噬菌體展示技術(shù)的重要性。我們也一直在研發(fā)更加優(yōu)秀的酶標(biāo)抗體,現(xiàn)在就讓我們來(lái)了解華安生物最新M13酶標(biāo)抗體吧。
Product Name Code Number Product Type
Anti-M13(HRP) Antibody EM1902-18 Mouse monoclonal antibody
Anti-M13(HRP) Antibody EM1902-19 Mouse monoclonal antibody

實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證:
Fig1: Elisa Test of M13 antibody (HRP)(EM1902-19) Binding to M13 Phage.
Samples were blocked with 1% BSA for 1 hours at 37°C and incubated with the primary antibody (EM1902-19, 1/10000) for 1 hours at 25°C. The M13 antibody was repeatedly frozen and thawed for 4 times at -80°C, 4°C, 37°C,.

 
Fig1: Elisa Test of M13 antibody (HRP) (EM1902-18) Binding to M13 Phage.
Samples were blocked with 1% BSA for 1 hours at 37°C and incubated with the primary antibody (EM1902-18, 1/10000) for 1 hours at 25°C. The M13 antibody was repeatedly frozen and thawed for 4 times at -80°C, 4°C, 37°C,.
來(lái)源:杭州華安生物技術(shù)有限公司
聯(lián)系電話:88062880
E-mail:simaxj@huabio.cn

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