為了支持新型冠狀病毒（COVID-19）的檢測及疫苗研發(fā)工作，美國疾病預(yù)防控制中心（CDC）和中國政府都已完成了新型冠狀病毒基因組的測序并將結(jié)果提交至US NCBI GenBank® 數(shù)據(jù)庫^[1]。近日，IDT收到了來自世界各地研究人員關(guān)于新型冠狀病毒檢測試劑盒的詢問，以下是部分簡要說明。
 
美國疾病預(yù)防控制中心      
美國疾病預(yù)防控制中心檢測試劑盒* 靶向COVID-19核衣殼蛋白基因（N-基因）上的不同位點。該試劑盒中的3組引物/探針必須與靶向人RNase P基因的內(nèi)部對照同時運(yùn)行。每個患者樣本共需進(jìn)行4次qPCR檢測。

1. 該檢測試劑盒采用一步法qPCR反應(yīng)（即逆轉(zhuǎn)錄和后續(xù)qPCR反應(yīng)在同一步驟中完成）；
2. 所有3次N-基因檢測只有在Cq <35時方可視為陽性結(jié)果；
3. RNase P內(nèi)部對照反應(yīng)是關(guān)鍵。Cq >35表示樣本提取不佳，需要重復(fù)實驗；  
敬請查閱最新的美國疾病預(yù)防控制中心 COVID-19 RT-PCR檢測方法實驗室指南，獲取相關(guān)文檔及實驗方案。
 
與其他檢測試劑盒的比較
 
世界衛(wèi)生組織（WHO）
世界衛(wèi)生組織實驗方案不同于美國疾病預(yù)防控制中心實驗方案。世界衛(wèi)生組織建議需進(jìn)行3次qPCR反應(yīng)來確認(rèn)是否感染COVID-19。盡管這是一套完整的實驗方案，但沒有美國疾病預(yù)防控制中心檢測方法來得快，因為它需要連續(xù)進(jìn)行3次檢測，且必須觀察到陽性結(jié)果才能進(jìn)行下一次檢測。該實驗方案按如下順序進(jìn)行檢測：

1. 冠狀病毒E-基因
2. RdRP基因：針對SARS 冠狀病毒和其他蝙蝠相關(guān)冠狀病毒
3. RdRP基因：針對COVID-19
 
中國疾病預(yù)防控制中心
中國疾病預(yù)防控制中心檢測試劑盒建議采用2組引物/探針。第1組靶向ORF 1ab，第2組用于確認(rèn)COVID-19的N-基因。
 
對照組
初步的電子模擬分析表明，搭配使用 IDT N-基因陽性對照組模板**與美國疾病預(yù)防控制中心檢測試劑盒，與使用中國疾病預(yù)防控制中心、泰國衛(wèi)生部以及HKU的引物/探針組進(jìn)行類似實驗獲得的結(jié)果相符。當(dāng)然，這是基于電子模擬研究，建議用戶在自己的實驗室中對所選試劑盒進(jìn)行驗證。
 
如需了解更多信息，請登錄
http://www.idtdna.com/pages/landing/coronavirus-research-reagents
參考文獻(xiàn)
1.  (2020) 2019 Novel Coronavirus (2019-nCoV), Wuhan, China. [Online] US Centers for Disease Control and Prevention. [Accessed 28 Jan 2020].
 
* IDT并非、也未聲稱是美國疾病預(yù)防控制中心冠狀病毒引物探針序列的主要、首選或推薦供應(yīng)商。IDT可獨(dú)立提供CDC公布的用于冠狀病毒檢測的引物和探針序列，訂購非常方便。
 
** IDT對照并非由CDC設(shè)計、檢測和驗證，也未得到CDC或其他公共衛(wèi)生機(jī)構(gòu)的認(rèn)可。這些對照由IDT單獨(dú)設(shè)計，針對SARS、MERS和COVID-19的核衣殼蛋白全基因，是為了方便客戶而提供的。如果用于解釋檢測結(jié)果，最終用戶應(yīng)進(jìn)行對照驗證。
 
用于2019新型冠狀病毒（COVID-19）檢測的IDT試劑
COVID-19 qPCR探針
IDT可提供美國疾病預(yù)防控制中心* 設(shè)計的4次COVID-19檢測試劑盒，用于病毒鑒定。3次檢測靶向COVID-19核衣殼蛋白基因（N-基因）上的不同位點。第4次內(nèi)部對照檢測靶向人RNase P基因，必須同時運(yùn)行。
 
該試劑盒遵循ISO 13485:2016標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)，其中包含引物和5’ FAM / 3’ Black Hole Quencher® (BHQ) 探針，溶于IDTE (pH 7.5) 中，并于1–2個工作日內(nèi)發(fā)貨，在常溫下進(jìn)行運(yùn)輸。
 

產(chǎn)品	貨號
2019-nCoV試劑盒，50 rxn	10006604
2019-nCoV試劑盒，100 rxn	10006605
2019-nCoV試劑盒，500 rxn	10006606

 
COVID-19質(zhì)粒對照組
IDT還可提供COVID-19對照質(zhì)粒**，其中包括COVID-19、SARS或MERS的核衣殼蛋白全基因。COVID-19 CDC qPCR探針靶向nCoV核衣殼蛋白基因區(qū)域，該基因存在于COVID-19_N陽性對照質(zhì)粒中。Hs_RPP30陽性對照試劑盒包含一部分RPP30基因，它是人類基因組中的單拷貝基因。對照質(zhì)粒溶于250 µL（200,000個拷貝/µL）的IDTE（pH 8.0）中，并于1–2個工作日內(nèi)發(fā)貨，在常溫下進(jìn)行運(yùn)輸。  
 

產(chǎn)品	貨號
2019-nCoV_N陽性對照	10006625
Hs_RPP30陽性對照	10006626
MERS-CoV對照	10006623
SARS-CoV對照	10006624

 
這些產(chǎn)品僅供研究使用 (RUO)。
(如需最新的US CDC檢測方法相關(guān)文檔及實驗方案，請登錄
https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-nCoV/lab/index.html)
 
聯(lián)系我們
如需詢價或訂購，請通過 < coronavirus@idtdna.com> 聯(lián)系我們。
我們也將樂于為您提供其他試劑的咨詢信息。
 
關(guān)于IDT
Integrated DNA Technologies, Inc. (IDT) 致力于面向生命科學(xué)界開發(fā)、生產(chǎn)并銷售核酸產(chǎn)品，用于學(xué)術(shù)與商業(yè)研究、農(nóng)業(yè)、醫(yī)療診斷、藥物開發(fā)等領(lǐng)域。IDT開發(fā)了多項針對基因組應(yīng)用的專利技術(shù)，如新一代測序、CRISPR基因組編輯、合成生物學(xué)、數(shù)字PCR以及RNA干擾。憑借GMP服務(wù)，研究人員可利用IDT產(chǎn)品針對多種癌癥以及大多數(shù)遺傳性和傳染性疾病進(jìn)行診斷檢測。作為定制核酸生產(chǎn)領(lǐng)域的行業(yè)領(lǐng)軍者，IDT為超過130,000名生命科學(xué)研究人員提供服務(wù)。IDT生產(chǎn)總部位于美國愛荷華州科勒爾維爾，并在美國加利福尼亞州圣地亞哥、比利時魯汶以及新加坡設(shè)有生產(chǎn)工廠。