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熒光PCR法測(cè)貓杯狀病毒的檢測(cè)方法及原理

瀏覽次數(shù):7710 發(fā)布日期:2019-12-20  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
輕微的貓杯狀病毒通常會(huì)讓貓咪無(wú)精打采,有時(shí)會(huì)出現(xiàn)打噴嚏、口部眼部的分泌物增多等情況。病情嚴(yán)重是會(huì)導(dǎo)致貓咪呼吸困難,引起肺部炎癥。雖然該病的率很低,但是卻有著很強(qiáng)的傳染性,需要及時(shí)進(jìn)行診斷。由于多種病毒均可引起貓的呼吸道疾患,且癥狀具有類(lèi)似之處,因此診斷較為困難。

貓杯狀病毒(FCV)屬于RNA病毒,具有高變異性。在貓群中,無(wú)毒力或輕度毒力FCV的流行率高達(dá)36%。感染后貓?bào)w一般會(huì)表現(xiàn)為呼吸道病狀和口腔潰瘍,較少出現(xiàn)系統(tǒng)性病癥。

救助所和醫(yī)院的貓感染后潛伏期是1-5天,家貓感染后潛伏期可能長(zhǎng)達(dá)12天。這種病在成年貓中更嚴(yán)重。VS-FCV疾病的臨床病理特征與“傳統(tǒng)”FCV有很大區(qū)別,已報(bào)道的VS-FCV疾病癥狀包括持續(xù)高燒、厭食、抑郁、面部和四肢水腫、面部耳廓及足部有潰瘍或脫毛、肺水腫、凝血異常、胰腺炎、肝壞死。感染VS-FCV比傳統(tǒng)的FCV更早表現(xiàn)出病理變化。

診 斷

當(dāng)貓出現(xiàn)以下情況,VS-FCV的可能性較大。
全身性癥狀不能用其他原因來(lái)解釋?zhuān)娌炕蛑w水腫/大面積結(jié)痂/身體、腳、面部耳廓脫毛/皮膚潰瘍;
組織活檢或尸檢發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞壞死;
成年貓比小貓受影響更嚴(yán)重。
無(wú)論是傳統(tǒng)FCV還是VS-FCV感染都不能僅根據(jù)臨床癥狀進(jìn)行診斷。FCV有很多癥狀表現(xiàn),每一種癥狀也可能是其他病原體引起的。例如口腔潰瘍通常是FCV感染的癥狀,但貓皰疹病毒同樣可以引起口腔潰瘍。不正確稀釋的季銨和苯酚消毒劑也會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的口腔潰瘍,呼吸道癥狀。

VS-FCV具有快速生長(zhǎng)、體外組織培養(yǎng)易于傳播、環(huán)境穩(wěn)定性更強(qiáng)的特點(diǎn)。相比于非VS-FCV感染的細(xì)胞,VS-FCV感染的細(xì)胞保持ATP時(shí)間更長(zhǎng)。通過(guò)維持細(xì)胞ATP水平,VS-FCV分離物可以延遲細(xì)胞凋亡,產(chǎn)生并釋放更多的病毒顆粒。另外,維持細(xì)胞內(nèi)ATP水平可以促進(jìn)細(xì)胞的能量依賴(lài)性凋亡和防止細(xì)胞壞死。通過(guò)限制壞死細(xì)胞引起的炎癥反應(yīng),利于病毒在體內(nèi)復(fù)制。

這里介紹的方法是采用熒光PCR方法,可對(duì)口腔、鼻或眼結(jié)膜拭子樣本中的貓杯狀病毒(Feline Calic Virus,F(xiàn)CV)核酸片段進(jìn)行定性檢測(cè),可用于臨床對(duì)貓杯狀病毒的輔助診斷。適用于疑似FCV感染貓的輔助診斷,檢測(cè)樣本為感染貓的口腔、鼻或眼結(jié)膜拭子樣本。貓杯狀病毒檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)具備基線噪音小、陽(yáng)性信號(hào)明顯、反應(yīng)性好等優(yōu)點(diǎn)。

檢測(cè)原理:貓杯狀病毒檢測(cè)試劑盒針對(duì)貓杯狀病毒保守基因片段設(shè)計(jì)特異性引物及Taqman熒光探針,該探針能與引物擴(kuò)增區(qū)域中間的一段核酸序列發(fā)生特異性結(jié)合。在PCR延伸反應(yīng)中,Taq酶的外切活性將5’端熒光基團(tuán)從探針上切割下來(lái),使之游離于反應(yīng)體系中,從而脫離了3’端熒光淬滅基團(tuán)的屏蔽,分離后的熒光基團(tuán)在機(jī)器特定光源的激發(fā)下產(chǎn)生熒光,再由儀器的檢測(cè)單元進(jìn)行檢測(cè),從而實(shí)現(xiàn)對(duì)FCV的特異性檢測(cè)。BIOG試劑盒使用內(nèi)質(zhì)控體系,能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)檢測(cè)過(guò)程,有效防止假陰性結(jié)果的產(chǎn)生。

【BIOG貓杯狀病毒定量PCR檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品特點(diǎn)】

1.基線噪音小,陽(yáng)性信號(hào)明顯,非常容易判斷陰陽(yáng)性;

2.靈敏度高,能夠檢測(cè)出感染早期的弱陽(yáng)性樣本;

3.設(shè)置有內(nèi)標(biāo),可以監(jiān)控從提取到RCR檢測(cè)的全過(guò)程,可及時(shí)排除假陰性結(jié)果;

4.特異性好,與同部位感染的皰疹病毒、支原體、衣原體、波氏桿菌、鏈球菌、金黃色葡萄菌等病原菌無(wú)交叉反應(yīng);

5.反應(yīng)性好,可檢出不同基因型的杯狀病毒和基因變異的杯狀病毒。
來(lái)源:常州百代生物科技有限公司
聯(lián)系電話:0519-88050392-608
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標(biāo)簽: 貓杯狀病毒 定量PCR
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