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ELISA實(shí)驗(yàn)樣本前期的處理方法是不一樣的,科研朋友一定要多加注意

瀏覽次數(shù):5999 發(fā)布日期:2019-6-13  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
 ELISA試劑盒檢測(cè)的樣本是有多種類型的,如血清、血漿、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等,不同類型的檢測(cè)樣本前期的處理方法是不一樣的。實(shí)驗(yàn)樣本的處理可謂是ELISA實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟之一,所以科研朋友一定要多加注意。
一、均質(zhì)
    ①組織樣本:肉、肝食品類切細(xì),用絞肉機(jī)反復(fù)絞碎,混合均勻。
    ②水產(chǎn)樣本:去除樣品的非食用部分,食用部分切細(xì),用均質(zhì)器均漿;原料表面較臟時(shí),需適當(dāng)用蒸餾水清洗。

    ③蛋類:鮮蛋去殼,蛋黃和蛋白充分混勻。
    ④水果、蔬菜類:先用水洗去泥沙,然后除去表面的水分,取食用部分。

二、振蕩提取
    將提取溶劑加入到裝有樣品的具塞容器中,振蕩,使提取溶劑與容器內(nèi)的樣品充分接觸以深入到樣本組織內(nèi)部,提取待測(cè)組分。

    ①振蕩方式:振蕩器上進(jìn)行上下、往返式振蕩、手搖式上下振蕩。
    ②在組織樣本中加入有機(jī)溶劑之間提取時(shí),應(yīng)邊加邊振蕩,防止組織凝結(jié)成團(tuán),不利于提取。

三、濃縮
    由于凈化過程中引入的溶劑,可能會(huì)降低待測(cè)組分的濃度或者不適宜直接分析,需要去除全部有機(jī)溶劑。即試劑盒前處理步驟中把樣本在60℃氮?dú)庀麓蹈,再用?fù)溶液溶解干燥殘留物。

    濃縮方式:氮?dú)獯蹈沙s、壓縮空氣吹干除雜。
    請(qǐng)注意:
    ①在吹干樣本之前,用甲醇清洗針頭,防止雜質(zhì)干擾。
    ②在吹樣本時(shí),針頭應(yīng)在液面上空,避免與樣本接觸,防止產(chǎn)生交叉污染。
    ③樣本吹干后應(yīng)立即取下,避免吹的時(shí)間過長(zhǎng),影響zui終檢測(cè)結(jié)果。
    ④不同的藥物,吹干后樣本的保質(zhì)期不同,提倡待樣本回到室溫后立即復(fù)溶。
四、乳化現(xiàn)象
    在用有機(jī)溶劑提取過程中,如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象,解決的方法有:
    ①用細(xì)頭輕輕的攪拌,破壞乳化后,再重復(fù)離心。
    ②再加入適量的提取劑,重新振蕩。注意離心后要保證樣本的稀釋倍數(shù)不變。

五、凈化
    經(jīng)過提取的待測(cè)組分中通常含有一些會(huì)干擾試劑盒中抗原抗體反應(yīng)的雜質(zhì)或者是含有與待測(cè)物結(jié)構(gòu)相似的雜質(zhì)。將待測(cè)組分與雜質(zhì)分離的過程,我們稱為試劑盒中樣本的凈化。在我們現(xiàn)有的試劑盒前處理方法中涉及到的zui常見的凈化是:液液分配法。

    比如:用復(fù)溶液溶解干燥殘留物之前先加入適量的正己烷,在加入正己烷和復(fù)溶液渦動(dòng)后如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象,可以60℃水浴加熱,至乳化現(xiàn)象消失或減弱后,加大離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心。
發(fā)布者:上海研生實(shí)業(yè)有限公司
聯(lián)系電話:021-59963601
E-mail:3004902019@qq.com

標(biāo)簽: ELISA試劑盒
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