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如何確定數(shù)字PCR的LOB?

瀏覽次數(shù):4070 發(fā)布日期:2019-5-27  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
數(shù)字PCR技術(shù)是一項(xiàng)新的核酸檢測和定量技術(shù)。空白檢測限LOB (Limit of Blank)是判斷數(shù)字PCR技術(shù)檢測能力的重要參數(shù)。
LOB(the limit of blank)是一項(xiàng)統(tǒng)計(jì)學(xué)實(shí)驗(yàn)參數(shù)。在可信度大于95%的概率下,對(duì)于不含有分析物的樣品(空白樣品),LOB是可能觀察到的最高檢測結(jié)果。換句話說就是最大的假陽性數(shù)。
為什么要在數(shù)字PCR中計(jì)算LOB ?
在數(shù)字PCR (dPCR)中,多種因素可以引起假陽性。定量核酸時(shí)確定假陽性的cutoff對(duì)dPCR檢測的穩(wěn)定性至關(guān)重要。為了定義這個(gè)cutoff,檢測閾值通常設(shè)置在LOB值之上,而在檢測校準(zhǔn)期間必須首先為每個(gè)目標(biāo)確定空白LOB值。此外,實(shí)驗(yàn)LOB值對(duì)于判斷反應(yīng)是正還是負(fù)以及計(jì)算LOD值都是必要的。
95%置信度LOB如下表所示:
R:重復(fù)次數(shù),一般≧30
μ和α:分別為假陽性個(gè)數(shù)的平均值和標(biāo)準(zhǔn)方差
μcorr:校正平均值
當(dāng)μ=0(即假陽性永遠(yuǎn)不會(huì)出現(xiàn)),則LOB(95%)=0
當(dāng)LOB為非零時(shí),可以用概率分布加權(quán)的“減去假陽性”的方法來校正實(shí)驗(yàn)樣品中目標(biāo)核酸的量。
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