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數(shù)字PCR應(yīng)用文獻(xiàn)：兩種多重?cái)?shù)字PCR試劑檢測(cè)EGFR的活化和耐藥位點(diǎn)
數(shù)字PCR應(yīng)用文獻(xiàn)---
兩種多重?cái)?shù)字PCR試劑檢測(cè)EGFR的活化和耐藥位點(diǎn)
NaicaTMcrystal數(shù)字PCR
通常生物學(xué)樣本量有限，通過(guò)單次實(shí)驗(yàn)獲得足夠多的信息對(duì)于研究人員和診斷人員至關(guān)重要。NaicaTMcrystal數(shù)字PCR系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)了單次實(shí)驗(yàn)中同時(shí)檢測(cè)和定量多重生物標(biāo)志物，并確保數(shù)據(jù)精準(zhǔn)度和可信度，通過(guò)3個(gè)不同的熒光通道，非常明確地區(qū)分靶標(biāo)位點(diǎn)。這種簡(jiǎn)單快速的技術(shù)平臺(tái)能夠兼容多種熒光染料組合，大大地?cái)U(kuò)展了實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的可能性。
在NSCLC（非小細(xì)胞肺癌）治療中，EGFR（表皮生長(zhǎng)因子受體）是種常見(jiàn)的藥物作用靶點(diǎn)。EGFR活化突變位點(diǎn)，如L858R，L861Q和19外顯子缺失用于預(yù)測(cè)TKIs(酪氨酸激酶抑制劑)藥物藥效，同時(shí)EGFR T790M突變用于一代TKIs藥物耐藥預(yù)測(cè)。
為了在不犧牲結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性的情況下，在單個(gè)測(cè)試中檢測(cè)這些突變的數(shù)量，開(kāi)發(fā)了兩個(gè)多重方法。引物和探針使用NaicaTMcrystal數(shù)字PCR系統(tǒng)三種不同熒光通道，在Panel1中可同時(shí)檢測(cè)EGFR L858R、L861Q、T790M和野生型EGFR，在Panel2中可以同時(shí)檢測(cè)19外顯子缺失、T790M和野生型EGFR。所有的assays都在400copise/ul野生型DNA 背景下，EGFR突變等位基因的頻率分別為0.25%和0.1%（如圖）
為了在不犧牲結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性的情況下，在單個(gè)測(cè)試中檢測(cè)這些突變的數(shù)量，開(kāi)發(fā)了兩個(gè)多重方法。引物和探針使用NaicaTMcrystal數(shù)字PCR系統(tǒng)三種不同熒光通道，在Panel1中可同時(shí)檢測(cè)EGFR L858R、L861Q、T790M和野生型EGFR，在Panel2中可以同時(shí)檢測(cè)19外顯子缺失、T790M和野生型EGFR。所有的assays都在400copise/ul野生型DNA 背景下，EGFR突變等位基因的頻率分別為0.25%和0.1%（如圖）
這兩個(gè)3色數(shù)字PCR檢測(cè)EGFR試劑盒檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌患者跟NGS比較，測(cè)得的突變等位基因EGFR片段具有較強(qiáng)的相關(guān)性。（如圖）
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