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無血清快速細(xì)胞凍存液操作說明書

瀏覽次數(shù):11252 發(fā)布日期:2018-11-2  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

無血清快速細(xì)胞凍存液,通用于各種動(dòng)物細(xì)胞株。特別配方具有有效提高細(xì)胞凍存活率和復(fù)蘇活力。不含動(dòng)物來源性蛋白,能減少各類病毒、霉菌和支原體等的污染,確保凍存細(xì)胞安全。既適用于一般培養(yǎng)細(xì)胞的凍存,也適用于無血清培養(yǎng)細(xì)胞和蛋白表達(dá)細(xì)胞的凍存。

產(chǎn)品特色
1.高安全性,完全使用醫(yī)藥品等級(jí)原料進(jìn)行生產(chǎn),不含動(dòng)物成分,病毒、霉菌和支原體等污染可能性低,各批產(chǎn)品之間有更高的產(chǎn)品質(zhì)量一致性。
2.細(xì)胞存活率高,無批次差異。
3.完全凍存液配方,可直接使用,方便簡捷,可直接存放于-80℃冰箱凍存,無需經(jīng)過費(fèi)時(shí)的程序降溫過程(省時(shí)、省力、省錢)。

凍存液成分
無血清細(xì)胞,無血清干細(xì)胞及MSC凍存液

保存條件
儲(chǔ)存于4℃以下。質(zhì)量保障期從產(chǎn)品的生產(chǎn)日期起,為期3年。3個(gè)月以上沒有使用凍存液計(jì)劃時(shí),盡可能冷凍保存。為避免重復(fù)凍融過程可能導(dǎo)致的凍存液品質(zhì)下降和性能降低,推薦將100 ml產(chǎn)品分裝小瓶后,再存放于4℃以下或-20℃冰箱凍存。

使用方法
細(xì)胞冷凍保存方法
選擇凍存處于對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞有助于提高復(fù)蘇細(xì)胞存活率。
1.按照常用方法收集懸浮細(xì)胞或貼壁細(xì)胞于試管中。
2.按照培養(yǎng)細(xì)胞密度和所用細(xì)胞凍存管的尺寸計(jì)算所需凍存細(xì)胞數(shù)。
(參考:5×105至5×106 cells/ml)。
3.取相當(dāng)于所需細(xì)胞數(shù)的細(xì)胞懸浮液量,置于離心管中,離心收集培養(yǎng)細(xì)胞(參考離心條件:1,000~2,000 rpm,4℃,3~5 min)。移去離心管中的上清液。
4.加入適量的無血清型細(xì)胞凍存液于離心管中,使細(xì)胞濃度為5×105至5×106 cells/ml。緩慢地混合均勻,制成細(xì)胞混合液。
5.將離心管中的細(xì)胞混合液分裝于已標(biāo)示完全的冷凍保存管中。
6.直接將含細(xì)胞混合液的凍存管放入-80℃冰箱,長期冷凍保存。
7.若研究者需要液氮保存時(shí),可將完全凍結(jié)的凍存管(放入-80℃冰箱后至少一晝夜)移至-196℃液氮罐。

凍存細(xì)胞復(fù)蘇方法
1.從冰箱里取出細(xì)胞冷凍保存管,立即放入37℃振動(dòng)水浴槽中快速解凍。
2.待凍存管中細(xì)胞混合液完全融化后,立即加入1 ml細(xì)胞培養(yǎng)基于該冷凍管中與細(xì)胞混合,再將細(xì)胞混合液從凍存管中移入含有9 ml該細(xì)胞培養(yǎng)基的試管中,混合均勻。
3.離心收集培養(yǎng)細(xì)胞(參考離心條件:1,000~2,000 rpm,4℃,3~5 min),移去上清液。
4.清洗細(xì)胞,充分洗凈殘留凍存液。
5.加入適量的新鮮細(xì)胞培養(yǎng)基,使用移液管緩緩地均勻細(xì)胞混合液。適量地稀釋后,將細(xì)胞混合液移至事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)瓶中。
6.鏡檢后,研究者可根據(jù)各自方法和需要來進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。

復(fù)蘇細(xì)胞存活率

細(xì)胞株 凍存時(shí)間(月) 細(xì)胞存活率(%)
(凍存溫度-80℃)
293 12 97.6
Sp2/0 12 92.0
CHO-S 12 98.2

● 最好用處于對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行凍存。
● 控制好胰酶的消化時(shí)間,切記消化過度,會(huì)影響細(xì)胞復(fù)蘇效果。
● 重懸細(xì)胞的過程中,請(qǐng)務(wù)必要輕柔,以免損傷細(xì)胞,但同時(shí)也一定要充分重懸,這樣細(xì)胞在復(fù)蘇時(shí)才不會(huì)成團(tuán)。
● 細(xì)胞操作請(qǐng)注意無菌
 

發(fā)布者:上海一基實(shí)業(yè)有限公司二部
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