產(chǎn)生針對特定抗原的大量靶向抗體的過程。單克隆抗體是通過稱為雜交瘤的特定細(xì)胞的多個/相同拷貝產(chǎn)生的。為了產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞，需要將2個細(xì)胞融合，以便將2個細(xì)胞的特征結(jié)合到1個細(xì)胞中。其中一種細(xì)胞是生產(chǎn)細(xì)胞抗體，它是來自實(shí)驗(yàn)室小鼠的B淋巴細(xì)胞，另一種是腫瘤細(xì)胞，稱為骨髓瘤。腫瘤細(xì)胞具有無限生長的能力，并且以超過正常細(xì)胞生長的速度生長。Laboratroy生產(chǎn)的雜交瘤細(xì)胞比正常的抗體生產(chǎn)細(xì)胞復(fù)制快得多，并且單個雜交瘤無限期地生產(chǎn)特異性抗體。

雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生初由B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的特異性單克隆抗體。原始B淋巴細(xì)胞將產(chǎn)生單克隆抗體，這取決于在收獲B淋巴細(xì)胞之前注射入小鼠的抗原種類。一個小例子是，如果給老鼠注射某種病毒，老鼠體內(nèi)的B淋巴細(xì)胞會產(chǎn)生特定的病毒抗體。與腫瘤細(xì)胞融合產(chǎn)生雜交瘤，導(dǎo)致產(chǎn)生針對特定病毒的單克隆抗體。

雜交瘤細(xì)胞被置于能幫助它們生長并產(chǎn)生大量單克隆抗體的培養(yǎng)基中。培養(yǎng)單克隆抗體有兩種方法，一種是在實(shí)驗(yàn)室燒瓶中培養(yǎng)，即體外培養(yǎng)，另一種是在小鼠的胃壁中培養(yǎng)。將雜交瘤注射到小鼠體內(nèi)是獲取單克隆抗體的常見方法。該方法通過將來自用所需抗原免疫的小鼠的脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞混合來完成。骨髓瘤細(xì)胞需要失去合成HGPRT酶(次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶)的能力，該酶使細(xì)胞能夠利用細(xì)胞外的次黃嘌呤源作為前體來合成嘌呤。細(xì)胞有另一種合成嘌呤的途徑，因此缺乏HGPRT對細(xì)胞來說不是問題，但當(dāng)細(xì)胞暴露于氨基蝶呤時(shí)，它們不能利用這種其他途徑，完全依賴HGPRT生存。總而言之，未融合的骨髓瘤細(xì)胞不能生長，因?yàn)樗鼈內(nèi)狈�HGPRT，未融合的正常脾細(xì)胞也不能生長，因?yàn)樗鼈兊膲勖�有限。雜交瘤細(xì)胞無限生長，因?yàn)槠⒓?xì)胞伴侶提供HGPRT，而骨髓瘤伴侶是永生的。

步是將細(xì)胞融合混合物轉(zhuǎn)移到含有次黃嘌呤、氨基蝶呤和嘧啶胸苷的HAT培養(yǎng)基中。2釹步是檢測每種培養(yǎng)物的上清液，以確定產(chǎn)生所需抗體的位置。必須從每個抗體陽性培養(yǎng)物中分離出單細(xì)胞，并對其進(jìn)行傳代培養(yǎng)，這代表其抗體是單克隆的克隆。每個單細(xì)胞培養(yǎng)物分泌一種特定類型的抗體，該抗體針對特定的決定簇/選擇的抗原。3注冊營養(yǎng)師步是擴(kuò)大成功克隆的培養(yǎng)規(guī)模。雜交瘤培養(yǎng)物可以在體外培養(yǎng)容器中無限生長，產(chǎn)量為15-65 g/ml，在體內(nèi)使用小鼠，血清中的抗體濃度為0.5-15 mg/ml。在過去的幾年里，世界范圍內(nèi)的動物福利活動家正試圖限制使用老鼠來生產(chǎn)單克隆抗體。當(dāng)單克隆抗體產(chǎn)生時(shí)，它可以用作探針來追蹤、結(jié)合和純化誘導(dǎo)其形成的特定蛋白質(zhì)。

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