復(fù)方甘麥大棗顆粒對抑郁動物模型的抗抑郁作用及對海馬單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的影響

摘 要: 目的: 探討復(fù)方甘麥大棗顆粒對動物抑郁模型的抗抑郁作用。方法: 采用小鼠強迫游泳試驗、懸尾試驗、跳臺試驗和利血平引起大鼠排空腦內(nèi)單胺神經(jīng)遞質(zhì)抑郁模型。結(jié)果: 復(fù)方甘麥大棗顆粒 21． 25 g/kg 和 42． 5g / kg 劑量組可明顯延長小鼠強迫游泳累計不動時間。21． 25 g / kg 劑量組延長小鼠懸尾累計不動時間。與空白組比較有顯著性差異( P ＜ 0． 05，P ＜ 0． 01) 。復(fù)方甘麥大棗顆粒可明顯縮短逃避至平臺上的潛伏期 EL( s) ，減少錯誤次數(shù)�？蓪�抗利血平排空腦內(nèi)單胺神經(jīng)遞質(zhì)多巴胺( DA) 和腦內(nèi)皮質(zhì)酮( CORT) 濃度。結(jié)論: 復(fù)方甘麥大棗顆�？梢愿纳苿游镆钟粜袨�，具有抗抑郁作用，其機制可能與改善腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)多巴胺( DA) 傳遞，降低皮質(zhì)激素分泌有關(guān)。

關(guān)鍵詞: 復(fù)方甘麥大棗顆粒; 抗抑郁; 行為學(xué); DA; 皮質(zhì)酮

現(xiàn)代生活的快節(jié)奏以及精神、心理等方面的壓力，使抑郁癥的發(fā)病率明顯提高。嚴重軀體疾病、慢性病、腦器質(zhì)性疾病容易誘發(fā)或?qū)е乱钟舭Y，其中內(nèi)科病患者中抑郁發(fā)生率為 12% ～ 36% ; 巴金森氏病發(fā)生抑郁者為 50% ～ 70% ;腦卒中后抑郁發(fā)生率為 30% ～ 60% ; 老年期癡呆抑郁發(fā)生率為 10% ～ 40% ; 兒童患病率為1% 。然而目前尚沒有一種有效的治療方法能夠在療效、不良反應(yīng)及預(yù)防復(fù)發(fā)方面盡如人意，約 15% 的患者伴有自殺傾向，對社會穩(wěn)定與經(jīng)濟發(fā)展造成了很大影響。世界衛(wèi)生組織( WHO) 預(yù)測到2020 年抑郁癥將成為第二大致殘疾病。因此，抗抑郁藥物的研究越來越受到人們的重視。

中藥復(fù)方具有成分多、作用環(huán)節(jié)多、靶點多的特點，盡管單一成份含量低，作用不明顯，但可通過多靶點起作用，產(chǎn)生協(xié)同效益。既彌補了有效成份含量低的欠缺，也降低了不良反應(yīng)。因此，對于研究中藥復(fù)方的抗抑郁作用也越來越廣泛。為了證實復(fù)方甘麥大棗顆粒多環(huán)節(jié)治療 FD 的作用和確切機制，為復(fù)方甘麥大棗顆粒臨床應(yīng)用的拓展提供實驗依據(jù)，本文通過多種抑郁模型對復(fù)方甘麥大棗顆粒的抗抑郁作用和相關(guān)機制進行了研究。

1 實驗材料

1． 1 實驗用藥物 復(fù)方甘麥大棗顆粒: 由江蘇省中醫(yī)院制劑部提供。批號: 20140501 鹽酸氟西汀膠囊: 由禮來蘇州制藥有限公司提供。批號: 3436A201403 氫溴酸東莨菪堿注射液: 由上海禾豐制藥有限公司提供。批號: 02140401、利血平 Sigma 公司批號;BCBk8806v。

1． 2 實驗用儀器 大 / 小鼠跳臺實驗系統(tǒng) XR-3TB；強迫游泳實驗系統(tǒng)；懸尾實驗系統(tǒng): 上海欣軟信息科技有限公司制造。

1． 3 實驗用動物和飼料 ICR 小鼠，體質(zhì)量 20 ～ 22 g，由南通大學(xué)實驗動物中心提供，合格證號: SCXK － ( 蘇) 2014－ 0001。全價營養(yǎng)顆粒飼料: 由江蘇省協(xié)同醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司提供。批號: 20140618。

1． 4 實驗條件 室溫( 20 ± 2) ℃ ，濕度 55% ～ 65% ，光照適度，通風(fēng)潔凈良好。

1． 5 統(tǒng)計學(xué)處理 用 SPSS 16． 0 統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，統(tǒng)計學(xué)處理數(shù)據(jù)用( x珋± s) ，采用 t 檢驗。

2 實驗方法

2． 1 實驗分組和劑量 ①取 ICR 小鼠 150 只，雌雄各半，體質(zhì)量20 ～22 g，隨機分為以下 5 組，每組 30 只。空白組: 等量 NS，鹽酸氟西汀組: 6． 67 mg/kg; 復(fù)方甘麥大棗顆粒大劑量組: 42． 5 g/kg，復(fù)方甘麥大棗顆粒中劑量組: 21． 25 g/kg，復(fù)方甘麥大棗顆粒小劑量組: 10． 63 g/kg，給藥容量 20 m L/kg 分別進行對小鼠強迫游泳實驗、懸尾實驗和跳臺實驗。②取 SD 大鼠 60 只，雄性，體質(zhì)量 200 ～ 220 g，隨機分為 6 組，每組 10 只。適應(yīng)飼養(yǎng) 3 天后，每日給藥 1 次，正常組: 等量蒸餾水，1 mL/100 g，模型組: 等量蒸餾水，鹽酸氟西汀組: 5． 33 mg/kg，復(fù)方甘麥大棗顆粒低劑量組: 7． 5 g/kg，復(fù)方甘麥大棗顆粒中劑量組: 含生藥 15 g / kg，復(fù)方甘麥大棗顆粒高劑量組: 30 g/kg，1 m L/100 g，給藥容量 10 m L/kg。

2． 2 復(fù)方甘麥大棗顆粒對小鼠強迫游泳實驗 實驗在安靜的環(huán)境下進行，在正式強迫游泳實驗前進行預(yù)游泳實驗，將小鼠分別放入水深 10 cm，水溫 25 ℃ ，5000 m L 容器內(nèi)，適應(yīng)性游泳 2 min，預(yù)實驗結(jié)束后連續(xù)給藥 4 周。末次給藥后進行正式實驗，給藥 30 min 后，放入與預(yù)游泳相同的環(huán)境中，適應(yīng)性游泳 2 min 后計算后 4 min 內(nèi)小鼠強迫游泳的累計不動時間。( 小鼠表現(xiàn)為被動漂，掙扎行為消失持續(xù) 1min 被認定為不動狀態(tài)。

2． 3 復(fù)方甘麥大棗顆粒對小鼠懸尾實驗 實驗在安靜的環(huán)境下進行，連續(xù)給藥 4 周，末次給藥 30 min 后分別將每組小鼠尾部距末端 2 cm 處用膠帶條固定懸掛，適應(yīng) 2 min后計算 4 min 內(nèi)小鼠懸尾累計不動時間( 小鼠表現(xiàn)為被動懸掛，肢體運動消失時被認定為不動狀態(tài)) 。

2． 4 復(fù)方甘麥大棗顆粒對小鼠跳臺實驗 實驗在安靜的環(huán)境下進行，在正式跳臺實驗前進行預(yù)實驗訓(xùn)練。連續(xù)給藥四周后，末次給藥 30 min 后，將小鼠輕放于跳臺上，記錄小鼠停留在平臺上的潛伏期( SDL) 。小鼠自平臺跳下，四肢接觸電柵時，立即給予0.2mA電刺激，記錄小鼠逃避至平臺上的潛伏期( EL) 。記錄其第 1 次跳下平臺的時間，以及 5 min 內(nèi)跳下平臺次數(shù)( 錯誤次數(shù)) ，計算各組小鼠跳臺潛伏期以及錯誤次數(shù)。

2． 5 復(fù)方甘麥大棗顆粒對給予東莨菪堿注射液后小鼠跳臺實驗 末次實驗前腹腔注射東莨菪堿注射液 1 次，給藥30 min 后，將小鼠置于跳臺上，以小鼠四肢全部落到銅柵上為標志，記錄小鼠停留在平臺上的潛伏期( SDL) 。小鼠自平臺跳下，四肢接觸銅柵時，立即給予0.2mA電刺激，記錄小鼠逃避至平臺上的潛伏期( EL) 。記錄其第 1 次跳下平臺的時間，以及 5 min 內(nèi)跳下平臺次數(shù)( 錯誤次數(shù)) ，計算各組小鼠跳臺潛伏期以及錯誤次數(shù)。

2． 6 統(tǒng)計學(xué)方法 各組大鼠連續(xù) 4 周，末次給藥后，各組大鼠即刻腹腔注射利血平 4 mg/kg，之后 2、4、6、18 h 測定大鼠的肛溫。將體溫計探頭插入大鼠肛門內(nèi)，深度以溫度計探頭完全進入肛門為準，維持至少 2 min。動物處死前禁食不禁水，24 h 后處死大鼠，迅速置 － 20 ℃ 冰箱中 15 min后斷頭取出大腦，取 0． 2 g 置 2 m L 生理鹽水中冰浴勻漿，3000 r / min 離心 10 min，取上清液，采用 ELISA 法測定單胺類神經(jīng)遞質(zhì) DA，CORT 的含量，結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)處理。比較各組間的差異。其余腦組織作病理組織學(xué)檢查。

4 討論

現(xiàn)代生活的快節(jié)奏以及精神、心理等方面的壓力，使抑郁癥的發(fā)病率明顯提高。嚴重軀體疾病、慢性病、腦器質(zhì)性疾病容易誘發(fā)或?qū)е乱钟舭Y，其中內(nèi)科病患者中抑郁發(fā)生率為 12% ～ 36% ; 巴金森氏病發(fā)生抑郁者為 50% ～ 70% ;腦卒中后抑郁發(fā)生率為 30% ～ 60% ; 老年期癡呆抑郁發(fā)生率為 10% ～ 40% ; 兒童患病率為 1% 。

然而目前尚沒有一種有效的治療方法能夠在療效、不良反應(yīng)及預(yù)防復(fù)發(fā)方面盡如人意，約 15% 的患者伴有自殺傾向，對社會穩(wěn)定與經(jīng)濟發(fā)展造成了很大影響。世界衛(wèi)生組織( WHO) 預(yù)測到 2020 年抑郁癥將成為第二大致殘疾病。因此，抗抑郁藥物的研究越來越受到人們的重視。

抑郁癥( depression) 是一種以顯著而持久的情緒低落、言語、減少、精神和行動遲緩等，表現(xiàn)為各種軀體癥狀、生理功能障礙的臨床綜合癥。在中醫(yī)觀念中它屬于郁癥范疇，總因郁怒、思慮、悲哀、憂愁七情之所傷。導(dǎo)致臟腑陰陽氣血失調(diào)而成。現(xiàn)代化學(xué)合成藥; 如安定、氟西汀等在治療和緩解抑郁癥狀方面有一定的療效; 但是長期服用會出現(xiàn)嚴重的不良反應(yīng); 導(dǎo)致患者被迫停止治療。因此，醫(yī)學(xué)界越來越重視從傳統(tǒng)中藥中開發(fā)抗抑郁藥。中醫(yī)藥在治療抑郁癥方面有獨特的優(yōu)勢，其不良反應(yīng)低、療效顯著。中藥在治療抑郁癥方面的優(yōu)勢已得到越來越多人的認可。

甘麥大棗湯治療抑郁癥臨床資料表明總有效率 90%以上。章永紅名中醫(yī)根據(jù)抑郁癥多為心氣虛證在臨床運用甘麥大棗湯加合歡皮，地龍治療，取得較滿意療效，而且患者并發(fā)癥少，不良反應(yīng)小，有較好的治療依從性。臨床使用甘麥大棗湯加合歡皮，地龍治療后，臨床效果可靠，用藥安全。臨床觀察使用該方有效率在 93． 7% 。為了進一步驗證復(fù)方甘麥大棗湯的有效性，進行了實驗研究。

本實驗采用強迫游泳實驗和懸尾實驗是國際上用于抗抑郁常見動物模型，其原理均是通過對動物施以無法逃避的應(yīng)激刺激，造成動物的行為絕望以模擬人類的抑郁癥癥狀。結(jié)果表明: 復(fù)方甘麥大棗顆�？裳娱L小鼠懸尾和強迫游泳累計不動時間。對給予東莨菪堿所至小鼠記憶障礙后，復(fù)方甘麥大棗顆�？裳娱L小鼠跳臺潛伏期，減少錯誤次數(shù)。說明給予復(fù)方甘麥大棗顆粒后，對東莨菪堿所至記憶障礙有一定的改善作用。

利血平是一種抗腎上腺素能降壓藥，可消耗大腦內(nèi)的腎 上腺素、5－ 羥色胺等神經(jīng)遞質(zhì)。作為降壓藥，長期應(yīng)用利血平可引起一系列抑郁癥狀，如失眠、悲觀、失望憂愁、沮喪，甚至部分病人可以產(chǎn)生自殺念頭等。藥理學(xué)研究顯示，利血平的藥理作用是通過消耗腦內(nèi)神經(jīng)末梢囊泡內(nèi)的單胺遞質(zhì)而實現(xiàn)其作用，實驗采用 4 mg/kg 利血平腹腔注射，可造成 5 － HT、NA、DA 等與人類精神情感活動有關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)的改變，中腦一邊緣葉 DA 系統(tǒng)主要調(diào)控情緒，實驗表明復(fù)方甘麥大棗顆粒各劑量組有阻斷利血平排空腦內(nèi)單胺多巴胺( DA) 神經(jīng)遞質(zhì)的趨勢，但作用不明顯。

研究證 實 抑 郁 癥 患 者 血 漿 的 促 腎 上 腺 皮 質(zhì) 激 素( ACTH) 和 CORT 均濃度升高，而經(jīng)抗抑郁治療后隨著抑郁緩解兩者濃度下降。本實驗結(jié)果也表明復(fù)方甘麥大棗顆粒通過降低腦內(nèi)皮質(zhì)酮( CORT) 濃度治療抑郁癥。

采用利血平誘發(fā)抑郁大鼠 24 h 內(nèi)，病理組織學(xué)檢查表明各組動物的腦組織海馬 CA1 和 CA3 區(qū)病理組織形態(tài)學(xué)無明顯改變。可能與一次注入利血平有關(guān)。以上實驗為復(fù)方甘麥大棗顆粒用于臨床通過了初步的實驗依據(jù)。