聚焦微生物研究-（系列一）

瀏覽次數(shù)：6069　發(fā)布日期：2015-3-20　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

適用于您微生物學(xué)應(yīng)用的活菌 PCR 技術(shù)

對存活微生物實施快速、敏感和特異性檢測是許多微生物學(xué)研究和質(zhì)控對照領(lǐng)域的基本需求。real-time PCR 等基于 DNA的擴(kuò)增技術(shù)能夠提供所需的速度和特異性。活菌 PCR 是微生物學(xué)研究的新一代技術(shù)，它將細(xì)胞的存活信息與 PCR 類檢測法的速度和特異性整合在一起。

活菌 PCR 技術(shù)工作原理

活菌 PCR 是一項創(chuàng)新型的技術(shù)，能夠分辨存活和死亡的微生物。QIAGEN 的活菌 PCR 系統(tǒng)中使用了 DNA 的嵌入試劑單疊氮丙啶（PMA）。PMA 是一類能夠在 DNA 水平上區(qū)分微生物存活與否的化學(xué)分子，當(dāng)使用特定波長的激光激活 PMA 時，PMA 會嵌入 DNA 并與之共價結(jié)合。在后續(xù)的 PCR 反應(yīng)中被修飾 DNA 的擴(kuò)增將受到抑制，從而導(dǎo)致擴(kuò)增信號降低。

PMA 無法透過完整的生物膜結(jié)構(gòu)。這意味著來自存活微生物的 DNA 由于有完整膜結(jié)構(gòu)包裹而不會受到 PMA 修飾，因此可以被 PCR 反應(yīng)檢測出來。微生物死亡細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu)由于失去了其原有的保護(hù)功能，PMA 能夠進(jìn)入細(xì)胞并修飾其中的 DNA。死亡微生物細(xì)胞中被修飾的 DNA 在PCR 反應(yīng)時受到抑制，從而導(dǎo)致擴(kuò)增信號降低。

PMA 帶有強(qiáng)正電荷，這意味著它無法穿透完整的存活細(xì)胞膜。它同時具有一個錨定基團(tuán)，能夠在特定波長的光學(xué)激發(fā)下與 DNA 完成不可逆的結(jié)合反應(yīng)。這一特性使得 PMA 能夠競爭超越其他 DNA 嵌入染料與核酸的結(jié)合，成為 QIAGEN 的 BLU-V® Viability 產(chǎn)品線的基礎(chǔ)組件。


圖 2. 活菌 PCR 的原理。PMA 無法穿過存活微生物的完整膜結(jié)構(gòu)，因此后續(xù)的 PCR 反應(yīng)不會受到影響。與之相反，PMA 能夠穿過死亡微生物細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu)，進(jìn)而修飾 DNA 并抑制后續(xù)的 PCR 反應(yīng)。	“活菌PCR是一項可靠的區(qū)分微生物存活/死亡的技術(shù)，QIAGEN推出的解決方案則將此技術(shù)實現(xiàn)了標(biāo)準(zhǔn)化，使它可以更加方便地用于廣泛的相關(guān)應(yīng)用�！�