羅氏FFPET組織樣本抽提RNA試劑盒實驗結(jié)果分析

瀏覽次數(shù)：6447　發(fā)布日期：2015-2-28　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

High Pure FFPET RNA Isolation Kit基于離心柱法的抽提原理，在柱上直接進(jìn)行高效DNase消化，在整合的實驗流程中方便地去除殘留DNA。

圖1：抽提獲得寬泛的RNA片段范圍，F(xiàn)FPET RNA抽提物片段長度范圍在100-4000bp

使用3中不同的方法從乳腺癌組織的5um FFPET樣品中抽提總RNA。綠色線顯示了使用該方法抽提獲得的RNA長片段極少，以RNA降解片段為主�；疑€顯示的RNA抽提物覆蓋的片段范圍較廣，但在短片段RNA的分布存在較大的偏倚性。

結(jié)果：羅氏High Pure FFPET RNA Isolation Kit的抽提產(chǎn)物（藍(lán)色線）較均勻地覆蓋了整個片段分布范圍。

圖2：從近期和長期保存的FFPET樣品中均可抽提獲得高RNA得率

A）柱形圖顯示了從結(jié)腸癌組織和正常結(jié)締組織10um FFPET切片樣本中抽提獲得的RNA平均得率（n=24）樣本保存時間分別為＜6個月和＞5年。
結(jié)果：羅氏High Pure FFPET RNA Isolation Kit能獲得更高得率的RNA抽提產(chǎn)物。
B）顯示了圖A的最左側(cè)兩列柱狀圖，其24個重復(fù)樣本各自的RNA得率。24個重復(fù)樣本來自于組織的連續(xù)切片，以避免來自不同組織區(qū)域的核酸含量差異。
結(jié)果：在常規(guī)研究中，同一組織樣本的不同F(xiàn)FPET切片的核酸得率存在差異。但對于同一種樣本，羅氏High Pure FFPET RNA Isolation Kit始終能獲得更高得率的RNA抽提產(chǎn)物。

圖3：從樣品中抽提獲得高質(zhì)量的RNA，提高RT-aPCR檢測靈敏度。

作為qPCR實驗中的核酸模板，要求高質(zhì)量的RNA，即良好的核酸得率、純度和片段大小分布，并能高靈敏度和不偏倚地檢測模板基因的表達(dá)情況。

從3中不同異種移植物切片組織中抽提RNA，取150ng總RNA，使用Transcriptor Universal cDNA Master進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，取10ng cDNA產(chǎn)物通過LightCycler 480 Real-Time PCR Instrument擴增檢測ALAST基因表達(dá)情況。

結(jié)果：High Pure FFPET RNA Isolation Kit抽提獲得的RNA模板（n=8）能在RT-qPCR實驗中獲得更高的檢測靈敏度。

產(chǎn)品信息