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普瑞邦飼料中真菌毒素檢測(cè)的解決方案

瀏覽次數(shù):25290 發(fā)布日期:2014-4-24  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
一、           伏馬毒素起因和特性
伏馬毒素主要是由串珠鐮刀菌菌f.moniliforme和f.proliferatum在一定溫度和濕度條件下繁殖所產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物。到目前為止,發(fā)現(xiàn)的伏馬菌素有FA1、FA2、FB1、FB2、FB3、FB4、FC1、FC2、FC3、FC4和FP1共11種。糧食在加工、貯存、運(yùn)輸過(guò)程中易受上述兩種真菌污染,特別是當(dāng)溫度適宜時(shí),更利于其生長(zhǎng)繁殖,從而產(chǎn)生出一類結(jié)構(gòu)性質(zhì)相似的毒素,其中FB1是其主要組分占60%以上,其毒性也最強(qiáng)。因此,伏馬毒素可以通過(guò)糧食加工、飼料生產(chǎn)等過(guò)程對(duì)畜牧業(yè)乃至人類健康產(chǎn)生較嚴(yán)重的危害。
FB1對(duì)食品污染的情況在世界范圍內(nèi)普遍存在,主要污染玉米及玉米制品,其污染的飼料主要為以玉米為原料的飼料。1996年我國(guó)對(duì)玉米、小麥等糧食作物中FB1污染進(jìn)行調(diào)查。發(fā)現(xiàn)不同地區(qū)均有不同程度污染。我國(guó)食道癌高發(fā)區(qū)林縣的玉米伏馬菌素污染率為48%。因此,人們懷疑該地區(qū)食道癌高發(fā)與食用污染此毒素玉米相關(guān)。該毒素已被世界衛(wèi)生組織列為近年來(lái)首先進(jìn)行研究的幾種霉菌毒素之一。
二、           伏馬毒素的危害
1.馬大腦白質(zhì)軟化癥              
  這是一種馬的神經(jīng)失調(diào)疾病。根據(jù)1988年南非研究人員的試驗(yàn)結(jié)果,每天以0.125mg/kg體重的水平給馬進(jìn)行皮下注射,大約7天后馬開(kāi)始發(fā)瘋、發(fā)狂,沖撞欄桿而死。解剖發(fā)現(xiàn)馬的大腦呈現(xiàn)白質(zhì)軟化癥狀。1989年,玉米中的伏馬毒素給美國(guó)有很多州的農(nóng)業(yè)和畜牧業(yè)造成了巨大的損失。               
  2.豬肺水腫             
  1992年和1994年美國(guó)和南非的科學(xué)家研究表明,每天伏馬毒素的攝取量在0.4mg/kg體重以上均可引發(fā)豬的肺水腫,還可造成豬生殖系統(tǒng)的紊亂,如早產(chǎn)、流產(chǎn)、死胎和發(fā)情周期異常等。這種病在美國(guó)及其他國(guó)家都有發(fā)現(xiàn)。
  3.小鼠肝癌              
  1991年南非科研人員對(duì)小鼠進(jìn)行了伏馬毒素的毒理試驗(yàn),試驗(yàn)結(jié)果表明伏馬毒素引發(fā)肝癌。1998年又對(duì)大鼠進(jìn)行了伏馬毒素毒理試驗(yàn),獲得相同的結(jié)果。                
  4.人類食道癌              
  早在1988年南非科學(xué)家就對(duì)食道癌發(fā)病率高和低的地區(qū)進(jìn)行過(guò)調(diào)查,食道癌發(fā)病率與主食玉米受伏馬毒素污染呈正相關(guān),進(jìn)一步的動(dòng)物試驗(yàn)也得到了相同的結(jié)果。1994年中國(guó)學(xué)者和日本學(xué)者對(duì)食道癌高發(fā)區(qū)的河南省林縣進(jìn)行了一次調(diào)查,發(fā)現(xiàn)該地區(qū)主食玉米中伏馬毒素水平高達(dá)30~50mg/kg,發(fā)霉玉米中伏馬毒素最高值達(dá)118.4mg/kg。目前伏馬毒素引發(fā)食道癌的機(jī)理還不清楚,需進(jìn)一步確證和研究。 
三、           各國(guó)對(duì)伏馬毒素的限量標(biāo)準(zhǔn)
  2001年美國(guó)食品與藥物管理局(FDA)發(fā)布了供人類食用的玉米和玉米產(chǎn)品伏馬毒素最高限量指導(dǎo)性公告,規(guī)定人類食用玉米中伏馬毒素最高限量為2mg/kg;同時(shí),F(xiàn)DA的畜牧醫(yī)學(xué)中心(CVM)也發(fā)布了動(dòng)物飼料中伏馬毒素的最高限量指導(dǎo)性公告,規(guī)定其限量范圍為1~50mg/kg。
              表2  FDA對(duì)伏馬毒素在動(dòng)物飼料中的推薦限量標(biāo)準(zhǔn)(2000年6月)
 玉米及其副產(chǎn)品用于下列動(dòng)物飼料
 推薦限量標(biāo)準(zhǔn)(FB1+FB2+FB3),mg/kg
 馬和兔
 5ppm(不超過(guò)日食量的20%)*
 豬和鯰魚(yú)
 20ppm(不超過(guò)日食量的20%)*
 產(chǎn)子的反芻動(dòng)物、家禽、貂
 30ppm(不超過(guò)日食量的20%)*
 大于3月用于屠宰的反芻動(dòng)物、用于制作裘皮的貂
 60ppm(不超過(guò)日食量的20%)*
 用于屠宰的家禽
 100ppm(不超過(guò)日食量的20%)*
 其他各種牲口和寵物
 10ppm(不超過(guò)日食量的20%)*
 *以干基作為計(jì)算基準(zhǔn)
四、           伏馬毒素的檢測(cè)
免疫親和柱+熒光儀檢測(cè)法和HPLC法。
符合國(guó)標(biāo)GBT 25228-2010 糧油檢驗(yàn) 玉米及其制品中伏馬毒素含量測(cè)定 免疫親和柱凈化高效液相色譜法和熒光光度法。
五、           普瑞邦伏馬毒素檢測(cè)方案介紹
(一)   免疫親和柱-高效液相色譜法:
Pribolab®(普瑞邦)應(yīng)用免疫親和柱凈化,利用高效液相色譜儀和熒光檢測(cè)器檢測(cè)可提供伏馬毒素測(cè)定的HPLC檢測(cè)方案,得出的結(jié)果準(zhǔn)確可靠,檢出限好,是一種很好的檢測(cè)伏馬毒素的方法。
1.   設(shè)備和耗材配置  
序號(hào)
品名
規(guī)格及參數(shù)
1
高效液相色譜儀及熒光檢測(cè)器
 
2
Pribolab真菌毒素專用色譜柱
150/250mm貨號(hào):PRC-18
3
PriboFast®伏馬毒素免疫親和柱
3ml,25支/盒,貨號(hào):IAC-050-3
4
高速均質(zhì)器
達(dá)到22000rpm 以上
5
PriboFast®玻璃纖維濾紙
100P,110mm,1.5μm 貨號(hào):GMF-110
6
PriboFast®八位泵流操作架
貨號(hào):EQ-PUMP-8
7
伏馬毒素標(biāo)準(zhǔn)品
固體或液體都可
8
衍生化試劑
2-巰基乙醇MCH2-Mercaptoethanol
鄰苯二甲醛
2. 樣品前處理:普瑞邦針對(duì)食品飼料提供不同的處理方案
花生,玉米,大米,小麥及其制品和飼料
----將50 g 研磨的樣品 + 5g鹽置于均質(zhì)杯中。
----加入100mL 甲醇:水(80:20)溶液。
----蓋上杯蓋,高速均質(zhì)5分鐘。
----4000r/min離心5min或用槽紋濾紙過(guò)濾;
----取10mL濾液并加入40mL PBS溶液將濾液稀釋,混勻。
,用玻璃微纖維濾紙過(guò)濾,取稀釋后液體待測(cè);
----將上步稀釋液通過(guò)微纖維濾紙過(guò)濾,濾液收集于玻璃注射器筒中,量取10mL。
3. 免疫親和柱凈化: 富集--洗滌--洗脫--收集全部洗脫液供化學(xué)衍生檢測(cè)用。
4. 衍生化反應(yīng)
使用鄰苯二甲醛OPA2-硫基乙醇MCE混合液對(duì)上述凈化樣品進(jìn)行衍生化反應(yīng)后迅速進(jìn)樣.
5. 高效液相色譜分析

 

HPLC-色譜柱 :C-18色譜柱   150 x 4.6 mm;
流  動(dòng)  相 :甲醇-0.1mol/L磷酸二氫鈉溶液  77:23
流  速  : 1 mL/min                         
柱  溫  : 室溫
進(jìn) 樣 體 積 : 20μL
熒光檢測(cè)器:λ-激發(fā)波長(zhǎng):335nm λ-發(fā)射波長(zhǎng):440 nm
HPLC配置:高效液相色譜儀帶有熒光檢測(cè)器
六、           溫馨TIPS:
1. 谷物、飼料中真菌生長(zhǎng)繁殖的有利條件主要是適宜的溫度與水分。如能將谷物、飼料等貯存于10℃以下,水分保持在10%以下,就能有效地防霉。
2. 從事真菌毒素科研及檢測(cè)的人員,必須注意防護(hù),如穿戴隔離衣帽,在進(jìn)行真菌分離培養(yǎng)工作時(shí),應(yīng)戴口罩,并盡量防止孢子飛揚(yáng)。
3. 操作臺(tái)面如有漏濺,應(yīng)立即用新配的5%次氯酸鈉消毒。以5%次氯酸鈉(NaOCl)處理時(shí),黃曲霉毒素于數(shù)秒鐘內(nèi)即被破壞,故是常用的消毒劑。
4. 也有應(yīng)用生物學(xué)方法解毒的報(bào)道,生物學(xué)方法成本低,收效大,可能是一種有前途的除毒措施。
鑒于霉菌毒素對(duì)人體的危害,提醒各位奮斗在抗毒一線的老師們一定要注意保護(hù)自身安全哦!
來(lái)源:青島普瑞邦生物工程有限公司
聯(lián)系電話:400-6885349
E-mail:info@pribolab.cn

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