診狀

可能的原因

解 決 方 法

（ 一 ）

保留時間變化

1. 柱溫變化

柱恒溫

2. 等度與梯度間未能充分平衡

至少用 10 倍柱體積的流動相平衡柱

3. 緩沖液容量不夠

用 >25mmol/L 的緩沖液

4. 柱污染

每天沖洗柱

5. 柱內(nèi)條件變化

穩(wěn)定進(jìn)樣條件 , 調(diào)節(jié)流動相

6. 柱快達(dá)到壽命

采用保護(hù)柱

（ 二 ）

保留時間縮短

1. 流速增加

檢查泵 , 重新設(shè)定流速

2. 樣品超載

降低樣品量

3. 鍵合相流失

流動相 PH 值保持在 3~7.5 檢查柱的方向

4. 流動相組成變化

防止流動相蒸發(fā)或沉淀

5. 溫度增加

柱恒溫

（ 三 ）

保留時間延長

1. 流速下降

管路泄漏 , 更換泵密封圈 , 排除泵內(nèi)氣泡

2. 硅膠柱上活性點(diǎn)變化

用流動相改性劑 , 如加三乙胺 , 或采用堿至鈍化柱

3. 鍵合相流失

同前 （ 二 ）3

4. 流動相組成變化

同前 （ 二 ）4

5. 溫度降低

同前 （ 二 ）5

（ 四 ）

出現(xiàn)肩峰或分叉

1. 樣品體積過大

用流動相配樣 , 總的樣品體積小于第一峰的 15%

2. 樣品溶劑過強(qiáng)

采用較弱的樣品溶劑

3. 柱塌陷或形成短路通道

更換色譜柱 , 采用較弱腐蝕性條件

4. 柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效

更換燒結(jié)不銹鋼 , 加在線過濾器 , 過濾樣品

5. 進(jìn)樣器損壞

更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子

（ 五 ）

鬼峰

1. 進(jìn)樣閥殘余峰

每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥 , 改進(jìn)閥和樣品的清洗

2. 樣品中未知物

處理樣品

3. 柱未平衡

重新平衡柱 , 用流動相作樣品溶劑 （ 尤其是離子對色譜 ）

4. 三氟乙酸 （TFA） 氧化 （ 肽譜 ）

每天新配 , 用抗氧化劑

5. 水污染 （ 反相 ）

通過變化平衡時間檢查水質(zhì)量,用 HPLC 級的水

（ 六 ）

基線噪聲

1. 氣泡 （ 尖銳峰 ）

流動相脫氣 , 加柱后背壓

2. 污染 （ 隨機(jī)噪聲 ）

清洗柱 , 凈化樣品 , 用 HPLC 級試劑

3. 檢測器燈連續(xù)噪聲

更換氘燈

4. 電干擾 （ 偶然噪聲 ）

采用穩(wěn)壓電源 , 檢查干擾的來源 （ 如水浴等 ）

5. 檢測器中有氣泡

流動相脫氣 , 加柱后背壓

（ 七 ）

峰拖尾

1. 柱超載

降低樣品量 , 增加柱直徑采用較高容量的固定相

2. 峰干擾

清潔樣品 , 調(diào)整流動相

3. 硅羥基作用

加三乙胺 , 用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相 PH 值 , 鈍化樣品

4. 同前 （ 四 ）4

同前 （ 四 ）4

5. 同前 （ 四 ）3

5. 同前 （ 四 ）3

6. 死體積或柱外體積過大

連接點(diǎn)降至最低 , 對所有連接點(diǎn)作合適調(diào)整 , 盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接管

7. 柱效下降

用較低腐蝕條件 , 更換柱 , 采用保護(hù)柱

（ 八 ）

峰展寬

1. 進(jìn)樣體積過大

同 （ 四 ）1

2. 在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展

進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散

3. 數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢

設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于 10 點(diǎn)

4. 檢測器時間常數(shù)過大

設(shè)定時間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的 10%

5. 流動相粘度過高

增加柱溫 , 采用低粘度流動相

6. 檢測池體積過大

用小體積池 , 卸下熱交換器

7. 保留時間過長

等度洗脫時增加溶劑含量也可用梯度洗脫

8. 柱外體積過大

將連接管徑和連接管長度降至最小

9. 樣品過載

進(jìn)小濃度小體積樣品