免疫組化染色具體操作步驟介紹

    （以美國(guó)ZYMED公司SP試劑盒為例）

    1、石蠟切片脫蠟至水。

    2、3%H2O2室溫孵育5~10分鐘，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。

    4、蒸餾水沖洗，PBS浸泡5分鐘，（如需采用抗原修復(fù)，可在此步后進(jìn)行）。

    5、 5~10%正常山羊血清（PBS稀釋）封閉，室溫孵育10分鐘。傾去血清，勿洗，滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗或一抗工作液，37℃孵育1~2小時(shí)或4℃過夜。

    6、PBS沖洗，5分鐘×3次。

    7、滴加適當(dāng)比例稀釋的生物素標(biāo)記二抗（1%BSA-PBS稀釋），37℃孵育10~30分鐘；或滴加第二代生物素標(biāo)記二抗工作液，37℃或室溫孵育10~30分鐘。

    8、PBS沖洗，5分鐘×3次。

    9、滴加適當(dāng)比例稀釋的辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素（PBS稀釋），37℃孵育10~30分鐘；或第二代辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，37℃或室溫孵育10~30分鐘。

    10、PBS沖洗，5分鐘×3次。

    11、顯色劑顯色（DAB或AEC）。

    12、自來水充分沖洗，復(fù)染，封片。

    13、冰凍切片免疫組化染色步驟

    14、冰凍切片4~8mm,室溫放置30分鐘后，入4℃丙酮固定10分鐘，PBS洗，5分鐘×3.用3%過氧化氫孵育5~10分鐘，消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。PBS洗，5分鐘×2。

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