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毛細(xì)管凝膠電泳的原理與應(yīng)用

瀏覽次數(shù):7711 發(fā)布日期:2013-8-8  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
    毛細(xì)管電泳技術(shù)(Capillary Electrophoresis, CE)又稱高效毛細(xì)管電泳(HPCE)或毛細(xì)管分離法(CESM),是一類以毛細(xì)管為分離通道、以高壓直流電場為驅(qū)動力,根據(jù)樣品中各組分之間遷移速度和分配行為上的差異而實(shí)現(xiàn)分離的一類液相分離技術(shù),迅速發(fā)展于80年代中后期,它實(shí)際上包含電泳技術(shù)和色譜技術(shù)及其交叉內(nèi)容,是分析科學(xué)中繼高效液相色譜之后的又一重大進(jìn)展。
     1987年,Cohen發(fā)表了毛細(xì)管凝膠電泳的工作。當(dāng)電泳從凝膠板上移到毛細(xì)管中以后,發(fā)生了奇跡般的變化:分析靈敏度提高到能檢測一個堿基的變化,分離效率達(dá)百萬理論塔板數(shù);分析片段能大能小,小到分辨單個核苷酸的序列,大到分離Mb的DNA;分析時間由原來的以小時計算縮減到以分、秒計算。CE可以說是經(jīng)典電泳技術(shù)與現(xiàn)代微柱分離技術(shù)完美結(jié)合的產(chǎn)物。
一.毛細(xì)管凝膠電泳的原理
     不同分子所帶電荷性質(zhì)、多少不同,形狀、大小各異。一定電解質(zhì)及PH的緩沖液或其它溶液內(nèi),受電場作用,樣本中各組分按一定速度遷移,從而形成電泳。電泳遷移速度(v)可用下式表示:
v=uE
其中E為電場強(qiáng)度(E=V/L,V為電壓,L為毛細(xì)管總長度)。u為電泳淌度。
     毛細(xì)管凝膠電泳是將板上的凝膠移到毛細(xì)管中作支持物進(jìn)行的電泳。凝膠具有多孔性,起類似分子篩的作用, 溶質(zhì)按分子大小逐一分離。凝膠粘度大, 能減少溶質(zhì)的擴(kuò)散, 所得峰形尖銳, 能達(dá)到CE中最高的柱效。電流通過導(dǎo)體時產(chǎn)生焦耳熱。傳統(tǒng)平板凝膠電泳的最大局限性在于其無法克服兩端高電壓帶來的焦耳熱所產(chǎn)生的負(fù)面影響。焦耳熱可使篩分介質(zhì)內(nèi)部出現(xiàn)溫度、粘度及分離速度的不均一,影響遷移、降低效率、使區(qū)帶變寬。由于這種負(fù)面影響與電場強(qiáng)度成正比,所以極大地限制了高電壓的引入。也難以提高電泳速度。毛細(xì)管電泳使樣品在一根極細(xì)的柱子中進(jìn)行分離。細(xì)柱可減小電流,使焦耳熱的產(chǎn)生減少;同時又增大了散熱面積,提高散熱效率,大大降低了管中心與管壁間的溫差,減少了柱子徑向上的各種梯度差,保證了高效分離。因此可以加大電場強(qiáng)度,達(dá)到100~200V/cm,全面提高分離質(zhì)量。
     在進(jìn)行分析時將毛細(xì)管內(nèi)充滿了凝膠,毛細(xì)管兩端通高壓電,使凝膠內(nèi)帶電分子移到毛細(xì)管相反電荷的一端。因?yàn)椴煌肿拥拇笮﹄姾杀炔煌,就以不同的速率在管中移動,達(dá)到毛細(xì)管終點(diǎn)也有快有慢。毛細(xì)管電泳即依此探測、分離不同分子。
二.毛細(xì)管凝膠電泳的特點(diǎn)
1.所需樣品量少、儀器簡單、操作簡便。
2.分析速度快,分離效率高,分辨率高,靈敏度高。
3.無需核酸染料,安全無毒。
4.無需制膠,省時省力。
5.無需照膠,杜絕人工分析結(jié)果誤差。
6.自動出結(jié)果,包括片段大小和樣品濃度,軟件可輸出電泳峰圖、凝膠電泳圖、DNA片段堿基差異分析、相對定量分析。



三.毛細(xì)管凝膠電泳的應(yīng)用
1.PCR條件的優(yōu)化及多重PCR的檢測
2.高分辨率的檢出,相差1-4bp的DNA片段的差異,及相同長度不同序列的差異
3.動態(tài)檢測酶切體系的進(jìn)程
4.評估基因組DNA質(zhì)量高低
5.HLA分型
6.STR分析
7.質(zhì)粒的純度分析
8.DNA/DNA雜交
9.DNA/蛋白互作
來源:北京昊諾斯科技有限公司
聯(lián)系電話:010-64842431/64838766/64838775-237
E-mail:Yangxue@herosbio.com

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