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如何選擇合適的二抗分子類型?

瀏覽次數(shù):3410 發(fā)布日期:2012-12-2  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
如何選擇合適的二抗分子類型?

二抗是在其它宿主體內(nèi)制備的能與一抗或一抗片段結(jié)合的抗體,上面通常連有酶、熒光素或生物素等耦聯(lián)標(biāo)記。二抗針對(duì)某一特定物種(如小鼠)的所有抗體(如IgG、IgMIgA等)均具有反應(yīng)性,因而使用標(biāo)記的二抗可以免去對(duì)每個(gè)一抗進(jìn)行標(biāo)記,大大節(jié)省了時(shí)間和費(fèi)用;此外,一個(gè)一抗分子可以同時(shí)結(jié)合幾個(gè)二抗分子,從而使信號(hào)大大增強(qiáng),提高了實(shí)驗(yàn)靈敏度。通常情況下,某一特定的實(shí)驗(yàn)中可能同時(shí)有幾種二抗可供選擇,如何能選擇到最適合該實(shí)驗(yàn)的二抗,需要綜合以下幾個(gè)方面進(jìn)行考慮:

1. 選擇全IgG形式還是F(ab’)2片段,或者Fab片段二抗
IgG形式的二抗是從抗血清中分離出來(lái)的完整的分子;這些抗體有一個(gè)Fc部分和兩個(gè)與抗原結(jié)合的Fab部分,因此是二價(jià)的,也是性價(jià)比最高的。 F(ab’)2片段形式的二抗是用胃蛋白酶消化IgG去除Fc部分,剩下兩個(gè)靠二硫鍵連接的結(jié)合抗原的Fab部分,依然是二價(jià)的;該抗體可避免與Protein A /G或與Fc受體的結(jié)合, 還由于其分子本身比較好,更容易滲透入細(xì)胞組織結(jié)構(gòu)內(nèi)而靈敏度更高 。Fab片段形式的二抗是用木瓜蛋白酶消化IgG后得到的;Fab片段抗體由于只含有一個(gè)結(jié)合位點(diǎn),可用來(lái)封閉內(nèi)源性的免疫球蛋白。

2. 根據(jù)一抗的種屬來(lái)源和類型選擇二抗

二抗應(yīng)選用與使用的一抗相同的物種來(lái)源,例如:如果一抗是小鼠源的抗體,二抗則選抗小鼠的二抗;如果一抗是從兔血清里制備的兔源抗體,則相應(yīng)的二抗需要選擇抗兔的二抗。另外,二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。這通常是針對(duì)單克隆抗體而言。其中單克隆抗體的類別及亞類通常會(huì)在產(chǎn)品說(shuō)明書中都會(huì)有描述,如果一抗是小鼠IgM,那么相應(yīng)的二抗就應(yīng)當(dāng)是抗小鼠IgM。如果一抗是小鼠IgG的某一亞類(IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3),那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結(jié)合,或者你也可以選擇專門針對(duì)這一亞類的二抗,例如,如果你的一抗是小鼠IgG1,那么你可以選擇抗IgG1的二抗。至于二抗本身是在什么動(dòng)物中制備的對(duì)二抗的質(zhì)量并無(wú)明顯的影響。

3. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求的特異性進(jìn)一步篩選二抗

Anti-IgG (H+L)是最常用也是性價(jià)比最高的二抗形式,這類抗體和IgG分子的重鏈和輕鏈都可以反應(yīng),也可以和其他的免疫球蛋白家族(IgM,IgA,IgD,IgE)和亞家族反應(yīng),因?yàn)樗械拿庖咔虻鞍锥加邢嗤妮p鏈。 Anti-IgGFc fragment specific這類抗體和IgG重鏈的Fc部分反應(yīng),與F(ab’)2Fab無(wú)交叉反應(yīng),但可能與IgMIgA有交叉反應(yīng);而抗IgGFcγ fragment specific則只與IgG重鏈反應(yīng),通常不能和IgAIgM任何表位反應(yīng)。 Anti-IgG,F(ab’)2 fragment specific則與Anti-IgGFc fragment specific則正好相反。

另外,與一個(gè)物種反應(yīng)的二抗可能與其他物種發(fā)生交叉反應(yīng),除非這類抗體經(jīng)過(guò)其他物種的血清蛋白吸附實(shí)驗(yàn)。如Jackson Horseradish Peroxidase-conjugated AffiniPure Mouse Anti-Goat IgG (H+L) (min X Ms, Hu, Rb Sr Prot) 小鼠抗山羊二抗,就是經(jīng)過(guò)了小鼠、人、兔血清的吸附, 其與小鼠、人、兔血清內(nèi)蛋白(包括免疫球蛋白)的交叉反應(yīng)降到最低。 當(dāng)其他物種免疫球蛋白的出現(xiàn)可能導(dǎo)致交叉反應(yīng)時(shí),推薦使用這類抗體。

來(lái)源:上海合星生物科技有限公司
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