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薄層色譜的使用及注意事項

瀏覽次數(shù):4749 發(fā)布日期:2012-1-30  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負
1、 怎樣提高點樣效率?
   點樣是造成TLC定量誤差的主要來源。實驗證明:定量毛細管更適合較小體積的點樣;微量注射器更適合較大體積的點樣。這主要是因為微量注射器受小氣泡、溶液回爬現(xiàn)象的影響較大。為避免不同定量毛細管間的點樣誤差、建議一塊薄層板上最好用同一只定量毛細管。但應(yīng)注意更換樣品時,應(yīng)將毛細管用超聲波或不同極性溶劑清洗干凈。在制備樣品時,溶樣溶劑黏度不能過高,以便于點樣;溶劑沸點過低則進樣體積易變,過高則會改變展開劑組成;對樣品溶解度過高會使樣點發(fā)生空心現(xiàn)象;常用的溶劑為甲醇、乙醇、丙酮。經(jīng)典TLC樣點原點一般為直徑3mm點間距1--2cm 底邊距1.5cm;HPLC樣點原點一般為直徑1mm點間距5mm 底邊距1cm。
  2、展開劑的選擇
    TLC與HPLC相比,一個突出的優(yōu)點就是流動相的選擇具有更大的靈活性。流動相的選擇的目的是使絕大部分樣品的RF值位于0.1--0.7之間并達到較好的分離,與此對應(yīng)的是流動相要有適當(dāng)?shù)膹姸群徒M成。流動相強度越大,溶質(zhì)RF值越大,但很可能降低分離能力;另外單一溶劑很難分離較復(fù)雜的混合物,根據(jù)相似相溶原理,要使用多元溶劑體系。一般展開劑體系選擇如下:根據(jù)分離樣品性質(zhì)、薄層色譜板性質(zhì)選擇一個二元溶劑體系,通過調(diào)節(jié)溶劑比例以尋求適合RF值,適合的RF值找到后,再尋求極性參數(shù)相同的二元溶劑體系兩個,以這三個組成為三點組成一個三角形,則可看到:三角形頂點是二元體系,邊是三元體系,三角形內(nèi)是四元體系,并且極性一致,可根據(jù)幾何原理得出任一點組成。這種方法較為直觀,也較簡單。
  3、TLC的通用顯色方法
    理想的顯色希望靈敏度高、斑點顏色穩(wěn)定、斑點與背景間的對比度好、斑點的大小及顏色的深度與物質(zhì)的量成正比。在樣品組成并不完全已知的情況下,通用顯色方法顯得成尤為重要。通用顯色法主要有:
  (1)、紫外照射法:方便,不破壞樣品;
  (2)、碘蒸氣法:通用性強,與紫外法結(jié)合靈敏度高于該兩法單獨使用;
  (3)、熒光試劑:制造熒光背景,使原來紫外下無熒光物質(zhì)被鑒別,有熒光物質(zhì)更明顯;
  (4)、硫酸溶液:對絕大多數(shù)有機物有效,但有破壞性。
發(fā)布者:上?普苌萍加邢薰
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