總流程：

超純水沖洗柱——流動相分離樣品——超純水沖洗柱——純乙睛保存柱

1.電源準備
打開穩(wěn)壓器()電源開關，須待電壓指示至220V后，才能開啟其他有關設備。

2.HP1100高效液相色譜儀的準備
試劑：三氟乙酸
乙腈(Fisher公司產品色譜純)
超純水(Millipore超純水)
冰乙酸
溶液配置：貯液瓶與流動相的準備
A液0.1%三氟乙酸(三氟乙酸1ml，超純水999ml)室溫保存
B液60%乙腈(乙腈600ml，超純水400ml)室溫保存
樣品液0.01%乙酸(冰乙酸10l超純水100ml)室溫保存
泵頭沖洗液：精濾后超純水或者是1%色譜純甲醇室溫保存
注：貯液瓶應用超純水淌洗干凈，備用。
流動相溶劑用潔凈G4玻沙漏斗精濾除去微小顆粒(目前未濾過溶液)。
操作者必須清楚并注明A、B貯液瓶盛裝為何種溶劑。
沖洗泵頭：用注射管于軟塑料管末端抽吸至有水流出，調節(jié)流速開關控制流速為20-30drop/min.(目前我們很少沖泵頭。)
①流動相管道排氣
如果，管道中氣泡較多，可通過彈擊管道，排除氣泡，并逆時針旋轉脫氣泵活塞使其松動，用注射管于流動相出口的塑料管末端抽吸至管道內氣泡排除完全。操作時，我們通常已經打開了脫氣機(氣泡嚴重影響分離效果，所以觀察管道中液體是否有氣泡非常重要。)
②開機
③進入HP1100操作系統(tǒng)
a.雙擊WIN-95操作界面中左下角Instrument1online圖標，進入HP1100工作站軟件操作界面。單擊工作站操作界面上方Runcontrol菜單，在下拉菜單中找到SampleInfo子菜單，單擊。在SampleInfo信息框內定義操作者、樣品前綴及編號、保存路徑等參數。在保存路徑項下，將可定義子目錄分別輸入操作者拼音縮寫，以方便檢索時互不干擾。
b.等待工作站操作界面中泵、柱溫箱、檢測器各指示圖標由灰色轉變?yōu)榫G色后，單擊泵、檢測器各圖標可從其各自彈出的菜單中設定流動相各溶劑比例、流速等。
(1)流速通常為1ml/min。檢測波長通常為280，或者254nm。
(2)A液設置為100%，運行15-30分鐘(目的是色譜柱的預平衡)，觀察基線走勢，基線應為直線，通過單擊“Balance”鍵可將基線調至零點。待基線平穩(wěn)后可進樣。
(3)調整A液為0，B液為100%再運行60分鐘(此時乙腈實際濃度為60%)
(4)在A液沖洗同時進行進樣環(huán)的沖洗：用500ul的針樣注射器，在load狀態(tài)，注入超純水500ul。(反復三次，若是20ul進樣環(huán)，則加入20ul以上，多余的水可廢液管流出。通常同一樣品上樣30次后應沖洗進樣環(huán)，如果不同樣品，最好，每次上樣前均進行沖洗。)
(5)吸取一定量可直接進樣的樣品溶液(上樣液最好用濾器濾過)，將進樣閥逆時針旋至Load檔，將進樣針從進樣孔處水平推入，按進樣器活塞將樣品溶液注射入進樣環(huán)后，立即將進樣閥順時針方向旋至Inject檔，與此同時，數據開始自動收集。
(6)此時樣品分析已經完成。在HP1100主操作界面的檢測器圖標，關閉檢測器，然后關閉色譜儀主機檢測器開關(目的是延長檢測器壽命)。將B通道調為0，A通道調為100%，即A液沖洗色譜柱約10-30min。用A液續(xù)沖洗色譜柱約10-30m(目的是沖出柱內殘留的雜質)
(7)A通道換為C通道(100%乙腈)續(xù)沖洗色柱約10-30min。(目的主要為保護柱)
④數據記錄的終止與保存
電腦將自動收集并保存數據，終止運行后，將自動彈出數據框，或者可通過DATAANALYSIS菜單，調出資料。

3.圖譜處理

4.關機
1)HP1100的關閉
在HP1100的主操作界面上分別單擊關閉泵、檢測器圖標，或通過菜單關閉。然后，單擊HP1100的主操作界面右上方“X”，退出Instrument1online程序，返回至WIN-95操作界面。單擊左下角“Start”菜單，單擊“Shutdown”,等待關機，待出現“Restart”提示后，按電腦主機電源鍵，關閉電腦主機及顯示器。
將所有使用儀器用布蓋好。關閉排氣扇、空調與穩(wěn)壓器開關。
2)清潔衛(wèi)生
實驗完畢后，打掃儀器室桌面與地面清潔，保持桌面整潔。
3)儀器使用記錄
記錄當天的儀器使用情況于指定記錄本上，包括儀器使用起止時間與出現問題的解決方案，并簽上操作者的名字。