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圖像采集與分析技術(shù)及凝膠成像分析系統(tǒng)操作方法

瀏覽次數(shù):4952 發(fā)布日期:2008-5-10  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
一、儀器設(shè)備
凝膠成像分析系統(tǒng) ChemiGenius2
二、儀器結(jié)構(gòu)
見(jiàn)下圖

三、原  理
樣品在電泳凝膠或者其他載體上的遷移率不一樣,以標(biāo)準(zhǔn)品或者其他的替代標(biāo)準(zhǔn)品相比較就會(huì)對(duì)未知樣品作一個(gè)定性分析。這個(gè)就是圖像分析系統(tǒng)定性的基礎(chǔ)。根據(jù)未知樣品在圖譜中的位置可以對(duì)其作定性分析,就可以確定它的成份和性質(zhì)。
樣品對(duì)投射或者反射光有部分的吸收,從而照相所得到的圖像上面的樣品條帶的光密度就會(huì)有差異。光密度于樣品的濃度或者質(zhì)量成線性關(guān)系。根據(jù)未知樣品的光密度,通過(guò)于已知濃度的樣品條帶的光密度指相比較就可以得到未知樣品的濃度或者質(zhì)量。這就是圖像分析系統(tǒng)定量的基礎(chǔ)。
采用最新技術(shù)的紫外透射光源和白光透射光源使光的分布更加均勻,最大限度的消除了光密度不均造成的對(duì)結(jié)果的影響。

四、適用范圍
1.蛋白質(zhì)、核酸、多肽、氨基酸、多聚氨基酸等其他生物分子的分離純化結(jié)果作定性分析。
2.可以確定生物分子的分子量。
3.可以應(yīng)用于生物分子的定量分析中。

五、操作步驟
1.打開(kāi)凝膠成像系統(tǒng)開(kāi)關(guān)。
2.打開(kāi)電腦,系統(tǒng)自動(dòng)打開(kāi)并進(jìn)入GeneSnap軟件。
3.打開(kāi)凝膠成像系統(tǒng)前面板,選擇使用紫外透射光源或者白光透射光源,將相應(yīng)光源安放到位。
4.將樣品放置在透射光源的樣品臺(tái)上。
5.在GeneSnap操作界面里面選擇使用Upper white光源,點(diǎn)擊綠色(即時(shí)成像)按鈕。

6.根據(jù)右側(cè)成像窗口中顯示的即時(shí)照片,手動(dòng)調(diào)節(jié)凝膠在樣品臺(tái)上的位置,直至成像窗口中凝膠在照片的中央位置,關(guān)上凝膠成像系統(tǒng)的前面板。
7.選擇紫外光源:
No Light 不使用燈照射,直接成像
Transilluminator 紫外透射光源
Epi long wave uv 長(zhǎng)波紫外反射光源(365nm)
Epi long wave uv 短波紫外反射光源(254nm)
Upper white 頂部白色反射光源
Lower white 底部白色透射光源
8.E.D.R.及N.F.的選擇: E.D.R. 動(dòng)態(tài)范圍擴(kuò)展,可以使照片由
12 位變?yōu)?6位,更加清晰
N.F. 中間部分區(qū)域校正,可以消除背景光
分布不均造成的影響
9.選擇照相時(shí)所使用的靈敏度:
High resolution 高分辨率
Medium sensitivity 中靈敏度
High sensitivity 高靈敏度
Max sensitivity 最高靈敏度
10. 選擇使用的濾光片: No Filter 適用于可見(jiàn)光、熒光
和化學(xué)發(fā)光物質(zhì)的照相
EtBr/UV 適用于紫外光照相
11. 點(diǎn)擊綠色(即時(shí)成像)按鈕,按鈕變?yōu)榧t色,成像窗口出現(xiàn)即時(shí)照片。
12.調(diào)整照相機(jī)光圈大小,使看到的凝膠照片亮度正合適。
13.調(diào)整圖片放大/縮小倍數(shù),使所照凝膠所成的照片大小與成像窗口大小相適應(yīng)。
14.調(diào)整照相機(jī)的焦距,使凝膠所成的照片最清晰。
15.設(shè)置曝光時(shí)間,使所成的照片清晰、亮度適中。
16.點(diǎn)擊紅色按鈕,凍結(jié)圖像并且在成像窗口中顯示(freeze image as current view in image window)。
17.調(diào)整預(yù)覽照片的亮度(Reset brightness),使照片明亮清楚。
18.調(diào)整預(yù)覽照片的對(duì)比度(Reset contrast),使照片上的圖案更加。
19.調(diào)整預(yù)覽照片的灰度(Reset gamma),使照片更加清晰。
20.把各個(gè)參數(shù)都調(diào)節(jié)到最佳之后,保存照片。 Toggle false color view Show saturation

六、注意事項(xiàng)
1.紫外凝膠照相時(shí)要防止EB污染儀器,在紫外透射燈樣品臺(tái)上墊上藍(lán)色和白色膠片,開(kāi)關(guān)凝膠成像系統(tǒng)前面板那、操作GeneSnap軟件之時(shí)都不可以戴手套。白光透射光源放置在紫外透射光源上面時(shí)要把藍(lán)色和白色膠片取出。

2.注意開(kāi)機(jī)順序,先開(kāi)凝膠成像系統(tǒng),再打開(kāi)電腦進(jìn)入GeneSnap軟件。
3.在使用紫外光源照相的過(guò)程中,不可以打開(kāi)凝膠成像系統(tǒng)前面板。

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