01 細胞轉染概述及應用

細胞轉染是指將外源的基因如DNA、RNA等采用各種化學、生物學或物理方法導入真核細胞的技術。是生物醫(yī)學研究的重要工具，廣泛應用于以下方面：

■研究基因功能

通過導入特定研究的目的基因，使目的基因過表達，研究其在細胞中的高表達情況下細胞功能的影響�；蛘呃�用siRNA或shRNA使目的基因不表達或者表達降低，研究基因缺失情況下對細胞功能的影響。

■蛋白質(zhì)表達生產(chǎn)

通過轉染編碼所需目的蛋白的基因，進行蛋白質(zhì)表達及純化，也可以通過融合熒光蛋白，研究目的蛋白在細胞內(nèi)的分布或者定位。

■細胞工程

通過轉染和篩選，獲得能夠穩(wěn)定表達外源基因的細胞系，即構建穩(wěn)轉細胞株。

■藥物篩選與毒性測試

轉染特定基因，從而驗證藥物靶點的有效性。通過高通量篩選，篩選出潛在藥物。

■基因治療

導入或者修復基因，治療一些遺傳病，也可轉染編碼抗原基因，進行疫苗研發(fā)。

02 細胞轉染分類

Part.1
按導入的核酸存在于宿主細胞的時間長短，分為瞬轉和穩(wěn)轉。

瞬轉：外源基因得以表達但它們并不會整合到宿主細胞的基因組中，隨細胞分裂逐漸丟失。

穩(wěn)轉：外源基因能夠整合到細胞的基因組中，隨細胞分裂持續(xù)表達，使得轉染細胞的子代細胞也同樣表達外源基因。
 

二者區(qū)別：

區(qū)別	瞬轉	穩(wěn)轉
目的不同	短時間獲得高水平的基因表達	獲得穩(wěn)定表達目的基因的細胞株
穩(wěn)定性不同	瞬時轉染由于基因未整合到染色體體，穩(wěn)定性較差	由于經(jīng)過篩選，目的基因整合到染色體中，其穩(wěn)定性好
方法不同	一般采用脂質(zhì)體轉染法	一般更偏向于病毒轉染、電轉等方法
篩選過程不同	轉染后一般不需要進行篩選	一般需要經(jīng)過篩選，挑選出目的基因整合到宿主染色體中的細胞
質(zhì)粒不同	質(zhì)粒不需要帶有抗性	一定要帶有特定的抗性以便于后續(xù)的克隆株篩選
表達時效不同	目的基因的表達通常持續(xù)幾天，不能穩(wěn)定遺傳	長時間穩(wěn)定表達目的基因
實驗周期不同	轉染后24h-96h收細胞	2-3周甚至3-4周篩選出穩(wěn)轉細胞克隆

Part.2

按照方法分為物理介導法、化學介導法，生物介導法。

物理介導法：通過物理的方法（例如電穿孔法、顯微注射法）直接將外源核酸導入到細胞內(nèi)，一般不需要使用任何化學物質(zhì)。效率較高，但對細胞損傷大，細胞存活率低。

化學介導法：通過使用一些化學物質(zhì)，如PEI、脂質(zhì)體等，來改變細胞膜的物理和化學性質(zhì)，使其對外源性DNA或RNA具有親和力，從而實現(xiàn)基因轉移。這種方法實驗操作簡單，周期短，但大多數(shù)不能長期穩(wěn)定表達外源基因。

生物介導法：一般利用病毒作為載體，將外源基因包裝后導入細胞，如慢病毒、腺病毒、逆轉錄病毒。這種方法可以實現(xiàn)外源基因的長期穩(wěn)定表達，也可進行體內(nèi)、體外高效、特異性的基因轉移。但實驗操作較為繁瑣，實驗周期較其他方法長。

 

 

由此看來，細胞轉染方法多種多樣。選擇哪種轉染方法，取決于實驗需求、實驗室條件、細胞的類型和轉染效率等因素。

目前，大多數(shù)實驗室使用較多的主要有化學介導中的脂質(zhì)體轉染（質(zhì)粒轉染）和生物介導中的慢病毒轉染法。質(zhì)粒轉染操作簡單，但有些細胞系不容易轉染，轉染效率低，給實驗帶來很多不便。而病毒轉染具有能夠穩(wěn)定表達，宿主范圍廣的優(yōu)勢，且其對非分裂的原代細胞、干細胞等具有較高的轉染效率，同時體內(nèi)外實驗均有效，同樣適用于體內(nèi)活體動物實驗，如動物成瘤等。

 
我們尚恩生物公司對常用的細胞系，原代細胞進行慢病毒轉染，包括細胞慢病毒轉染綠色熒光蛋白（ZsGreen）或者紅色熒光蛋白（mCherry、RFP）、細胞慢病毒轉染化學發(fā)光LUC、細胞慢病毒SV40永生化轉染，總共近40種穩(wěn)轉細胞系。也可以進行指定細胞的慢病毒轉染。
 

✔ 慢病毒轉染服務

服務 編號	轉染類別	試驗目標	實驗周期
SNTS-L001	GFP穩(wěn)轉	獲得GFP穩(wěn)定表達的細胞	3-4周
SNTS-L002	RFP穩(wěn)轉	獲得RFP穩(wěn)定表達的細胞	3-4周
SNTS-L003	mCherry穩(wěn)轉	獲得mCherry穩(wěn)定表達的細胞	3-4周
SNTS-L004	LUC穩(wěn)轉	獲得LUC穩(wěn)定表達的細胞	3-4周
SNTS-L005	SV40永生	獲得SV40永生化的細胞(以原代細胞為主)	6-8周

武漢尚恩生物簡介：

武漢尚恩生物技術有限公司坐落于武漢東湖高新區(qū)光谷生物城，專注于細胞及系列產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和服務，公司建有標準化GMP實驗室、動物房，已通過GB/T19001-2016/ISO9001:2015質(zhì)量管理體系認證，并獲得高新技術企業(yè)等多項榮譽。

公司主要研發(fā)生產(chǎn)細胞系、原代細胞、胎牛血清、基礎培養(yǎng)基、完全培養(yǎng)基、輔助試劑等系列產(chǎn)品，提供細胞及培養(yǎng)配套產(chǎn)品一站式采購服務；細胞庫儲存細胞系700余種，同時通過不間斷引種細胞擴大豐富細胞種類；公司還提供人源、小鼠源細胞系的STR鑒定，其他種屬細胞的種屬鑒定服務，細胞標志物檢測，污染檢測等細胞相關實驗服務。

尚恩生物細胞類產(chǎn)品為國內(nèi)各大高校生物實驗室、醫(yī)學院、生物研究機構及相關診斷、制藥公司等提供完善的細胞資源庫和相關配套試劑，公司將不斷追求卓越產(chǎn)品品質(zhì)為廣大科研工作者提供更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和服務！尚恩生物 — 您專業(yè)的細胞供應商！